目的    观察维持性血液透析（HD）患者死亡的危险因素，比较包括握力在内的不同营养评估指标对长期预后的预测价值。 方法    收集2008年7～9月北京协和医院血液透析中心规律透析的108例患者的临床资料，通过主观综合性营养评估、人体测量和生化指标进行营养状态评价。随访72个月，以死亡为观察终点，单因素及多因素Cox回归分析患者全因和心脑血管死亡的危险因素，评价不同营养指标预测死亡的价值。 结果    108例HD患者平均年龄（57.6±13.0）岁，随访6年后，35例（32.4%）患者死亡，其中62.9%（22/35）死于心脑血管事件。年龄增加、残余尿量少、血肌酐水平低、前白蛋白水平低和平均小腿围低是全因死亡的危险因素，握力较低人群的全因死亡风险（HR=2.842，95%CI 1.390～5.811）和心脑血管事件死亡风险（HR=2.826，95%CI 1.150～6.947）约为握力较高人群的2.8倍。调整性别、年龄、心脑血管及糖尿病史、体质量指数（BMI）、透析时间、尿素清除指数（Kt/V）、标准蛋白代谢率（nPCR）和前白蛋白后，低握力是全因死亡的独立危险因素（HR=2.505，95%CI 1.112～5.642）。握力用于预测男性和女性全因死亡的受试者工作特征曲线（ROC）下面积分别是0.705和0.682。 结论    低握力是维持性血液透析患者死亡的独立危险因素。

目的    前瞻性研究维持性血液透析（MHD）患者血清氨基末端脑钠肽前体    （NT-proBNP）、肌钙蛋白T（TnT）及高敏C反应蛋白（HsCRP）水平与心血管原因死亡及预后的关系。 方法    选取北京市海淀区3个透析中心接受透析治疗时间﹥3月的MHD患者229例为研究对象。 电化学发光法检测受试者血清NT-proBNP、TnT及HsCRP水平，记录患者临床资料。随访患者因心血管原因死亡、全因死亡的时间，随访时间为1 000 d。Kaplan-Meier生存分析法计算患者生存率；Cox比例风险模型法分析NT-proBNP 、TnT、HsCRP及3者联合检测对患者心血管原因死亡和全因死亡风险的预测价值。 结果    随访期间共37例患者死亡，其中因心血管疾病死亡20例（54.05%）。单因素分析结果显示，HsCRP≥3 mg/L、TnT≥0.1 mg/L、 NT-proBNP≥4 381 ng/L、年龄﹥60岁、合并糖尿病、心脑血管疾病、低血清白蛋白（Alb）与全因死亡事件发生有相关性。Cox分析结果显示，血清NT-proBNP、TnT、HsCRP升高与患者心血管疾病死亡及全因死亡事件发生相关，联合3项指标检测均升高者心血管疾病死亡风险（HR=25.25，P＜0.01）和全因死亡事件风险（HR=27.33，P＜0.01）明显升高。经年龄、心脑血管疾病史、糖尿病、白蛋白等校正后，上述指标均升高者对心血管疾病死亡（HR=14.33，P＜0.01）及全因死亡事件发生有较强的预测价值（HR=11.54，P＜0.01）。 结论    心肌生物学标志物联合检测有助于预测MHD患者心血管疾病死亡及全因死亡事件风险分层，MHD患者应定期常规检测相关指标。

目的    探讨膜性肾病（MN）患者血清抗磷脂酶A2受体（PLA2R）抗体与肾小球IgG4的相关性，评价血清抗PLA2R抗体和肾小球IgG亚型检测在膜性肾病诊断中的价值。 方法  病例来自2011年10月至2014年4月北京协和医院收治的MN患者，按照临床诊断分为特发性膜性肾病（IMN）组，膜型狼疮肾炎组（MLN）和继发性膜性肾病（SMN）组。间接免疫荧光法检测患者血清抗PLA2R抗体水平。免疫荧光法检测患者肾小球IgG亚型表达。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清抗PLA2R抗体和肾小球IgG4的诊断价值。 结果    IMN组血清抗PLA2R抗体阳性率69.5%（41/59）；MLN组阳性率4.8%（1/21）。IMN组中血清抗PLA2R抗体和肾小球IgG4共阳性者35例，血清抗PLA2R抗体阳性而肾小球IgG4阴性者6例，血清抗PLA2R抗体阴性而肾小球IgG4阳性者17例，血清抗PLA2R抗体和肾小球IgG4共阴性者1例。血清抗PLA2R抗体诊断IMN的灵敏度69.5%，特异度95.2%；肾小球IgG4亚型诊断IMN的灵敏度89.8%，特异度52.3%；两者共阳性的灵敏度59.3%，特异度100.0%。6例乙型肝炎病毒（HBV）相关性膜性肾病患者中4例血清抗PLA2R抗体阳性，3例干燥综合征（pSS）相关性膜性肾病和3例肿瘤相关性膜性肾病患者各有1例血清抗PLA2R抗体呈阳性。 结论    IMN患者血清抗PLA2R抗体阳性率高，SMN患者PLA2R抗体阳性率随病因而异；血清抗PLA2R抗体联合肾小球IgG4亚型检测有助于膜性肾病病因的诊断和鉴别诊断。

目的    建立高尿酸血症肾损害大鼠模型，研究高尿酸血症肾损害可能的发生机制。 方法    选用SPF级雄性SD大鼠18只（6～8周龄），体质量200～220 g，随机分入正常对照组和高尿酸血症肾损害模型组，每组9只。正常对照组大鼠早晚两次蒸馏水灌胃；模型组大鼠早晚两次腺嘌呤（0.1 g•kg^-1•d^-1）与氧嗪酸钾（1.5 g•kg^-1•d^-1）混悬液灌胃。连续给药21 d处死大鼠，留取血清检测尿酸（UA）、肌酐（Scr），留取大鼠肾脏组织，行PAS及Masson染色；应用黄嘌呤氧化酶（XOD）试剂盒，检测大鼠黄嘌呤氧化酶活性变化；Western印迹检测大鼠磷酸化表皮生长因子（p-EGFR）、总表皮生长因子（EGFR）的表达。免疫组化检测大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。 结果    与正常对照组大鼠比较，高尿酸血症肾损害模型组大鼠血尿酸及Scr均显著增高；PAS染色可见肾小球硬化，肾小管上皮细胞胞浆空泡，肾小管排列不规则、肥大、管腔扩张，炎症细胞浸润；Masson染色可见肾间质纤维化面积显著增加；模型组XOD活性显著增高[（52.68±9.79） μmol/L比（32.23±6.72） μmol/L，P＜0.05]；Western印迹显示模型组磷酸化EGFR表达上调；免疫组化显示模型组间质区域α-SMA表达显著上调。 结论    腺嘌呤与氧嗪酸钾联合灌胃法成功建立高尿酸血症肾损害模型。该模型可能通过调控肾脏EGFR磷酸化，上调α平滑肌肌动蛋白，活化肾间质成纤维细胞介导肾脏损伤进展。

目的    观察单侧输尿管结扎（UUO）模型小鼠肾脏间质纤维化程度，巨噬细胞浸润及极化的改变。 方法    8～10周龄C57BL/6J雄性小鼠12只，采用单侧输尿管结扎的方法建立UUO模型，分别于手术后第7、14天处死动物，留取肾组织标本。Masson染色法检测胶原组织的沉积，实时定量PCR法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA）、Ι型胶原（Col-1）mRNA表达；免疫荧光染色法检测肾间质巨噬细胞浸润程度及极化的表达变化。 结果    Masson染色结果显示：与对照组相比，实验组小鼠肾组织胶原纤维沉积增多；与7 d组相比，14 d组胶原纤维沉积增多（均P＜0.05）。免疫荧光染色结果显示：与对照组相比，UUO组小鼠肾组织α-SMA表达阳性的细胞增多；与7 d组相比，14 d组小鼠α-SMA阳性的细胞增多（均P＜0.05）。实时定量PCR结果显示：与对照组相比，实验组肾组织α-SMA、Col-1 mRNA表达增加；与7 d组相比， 14 d组小鼠肾组织α-SMA、Col-1 mRNA表达增加（均P＜0.05）。与对照组相比，术后14 d组小鼠M2型巨噬细胞亦增多（P＜0.05）；两组M1型巨噬细胞浸润数目的差异无统计学意义。 结论    UUO诱导的肾间质纤维化模型肾组织中的巨噬细胞浸润明显增加， 主要以M2型巨噬细胞浸润为主，推测M2参与了肾脏纤维化的形成。

目的    探讨沉默脯氨酸羟化酶2（PHD2）在人肾小管上皮细胞（HK-2）低氧损伤中对自噬的调控作用及相关机制。 方法    采用氯化钴（200 μmol/L）建立体外HK-2细胞的化学低氧模型，观察低氧培养后的不同时间点（0、6、12、24、36、48 h）电镜下的细胞超微结构改变，Alamar Blue法测定细胞存活率并评估细胞凋亡和自噬水平。同时转染HIF-1 siRNA、PHD2 siRNA，探讨PHD2在低氧情况下对自噬的调控机制。 结果    PHD2在常氧下也有表达，随着低氧刺激的持续其蛋白水平逐渐上调，24 h时出现明显变化（P＜0.01），48 h表达最为显著（P＜0.01）。PHD2 siRNA转染后HK-2细胞在低氧培养24 h时HIF-1的蛋白表达显著升高（P＜0.01），HIF-2α表达无明显改变。与阴性对照 siRNA组相比，PHD2 siRNA转染组Bcl-xl蛋白水平上调（P＜0.01），Bax及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调（均P＜0.01），同时细胞活力上升[（37.04±3.25%比（28.32±2.41）%，P＜0.01]。氯化钴处理前加入3-甲基腺嘌呤（3-MA，5 mmol/L）后，HK-2细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化以及细胞活力与PHD2 siRNA转染结果相似，同时电镜下显示自噬体较单纯低氧组减少，细胞的超微结构也相对完整。同时沉默PHD2和HIF-1α则消除了由单独沉默PHD2带来的保护作用。 结论    沉默 PHD2可能通过稳定HK-2细胞的HIF-1α活性、上调Bcl-xl蛋白水平，从而抑制细胞凋亡和自噬并减轻化学低氧诱导的细胞损伤。

目的    观察替米沙坦干预对尿酸性肾病模型大鼠尿酸盐转运蛋白(UAT)表达的影响，探讨替米沙坦对尿酸性肾病的保护作用及机制。 方法    （1）高尿酸（600 μmol/L）+不同浓度替米沙坦干预（10 nmol/L，100 nmol/L，1000 nmol/L，10000 nmol/L），肾小管上皮细胞NRK-52E培养48 h后，采用荧光定量PCR及普通PCR检测UAT及TGF-β1 mRNA的表达，Western印迹及细胞免疫荧光检测 UAT及TGF-β1、α-SMA蛋白的表达。（2）制备高尿酸大鼠模型：21只雌性Wistar大鼠随机分入正常对照组（Con），高尿酸模型组（HU，氧嗪酸钾200 mg/kg加高尿酸饲料），替米沙坦治疗组（Tel，替米沙坦10 mg/kg）。治疗4周后处死大鼠，抽取心尖血，检测 Scr、BUN及血尿酸（UA）。肾脏组织冰冻切片，HE染色，光镜观察肾小管有无尿酸盐结晶沉积。Western印迹法检测UAT在肾组织中的表达。 结果    （1）动物实验结果显示与对照组比较，高尿酸组显著抑制UAT mRNA表达（P＜0.01）；替米沙坦剂量依赖地拮抗高尿酸对UAT的抑制作用，并抑制高尿酸诱导的TGF-β1及 α-SMA表达（均P＜0.05）。（2）细胞实验结果显示与HU组比较，替米沙坦可明显降低高尿酸大鼠的血尿酸水平（189.9 μmol/L比204.5 μmol/L，P＜0.05），上调肾组织UAT的表达、下调TGF-β1表达（均P＜0.05）。 结论    替米沙坦显著抑制肾小管上皮细胞TGF-β1及 α-SMA表达，对尿酸性肾病肾脏纤维化有一定的保护作用，其机制可能与调节尿酸盐转运蛋白UAT表达有关。

目的    探讨Hippo通路分子在常染色体显性多囊肾病（ADPKD）发病机制中的作用，寻找可能的药物治疗靶点。 方法    采用免疫荧光染色、Western印迹和实时定量PCR技术检测Han:SPRD大鼠杂合型和ADPKD患者肾组织Hippo通路分子分布、表达量以及磷酸化水平的差异。小干扰RNA特异性抑制囊肿衬里上皮细胞（WT9-12）YAP（Yes kinase-associated protein）、TAZ（transcriptional coactivator with PDZ binding motif）和 LATS1（large tumor suppressor kinase1）的表达后观察对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。 结果    与野生型大鼠相比，Han:SPRD杂合型大鼠囊肿衬里上皮细胞LATS1表达降低；YAP表达量及去磷酸化活化水平增加；TAZ表达与分布无明显改变。ADPKD患者肾组织中，Hippo通路分子MST1/2（macrophage stimulating1/2）、LATS1 mRNA表达显著低于正常对照（P＜0.05），而YAP mRNA表达水平显著高于正常对照（P＜0.05）。抑制WT9-12细胞LATS1表达，能促进细胞增殖和分裂；下调YAP表达阻滞细胞于分裂间期，抑制增殖；下调TAZ表达对细胞增殖和周期无显著影响。 结论    ADPKD中Hippo通路效应因子YAP去磷酸化活性增强可能是导致疾病发生、发展的重要原因之一。体外实验证实下调YAP表达可抑制肾囊肿衬里上皮细胞分裂增殖, 提示YAP的表达和活性是潜在的多囊肾病治疗靶点。