目的    探讨氟伐他汀对氨基核苷嘌呤霉素（PAN）作用下足细胞β1整合素表达的影响及其机制。 方法    将体外培养的永生化人足细胞分为PAN、不同浓度氟伐他汀、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢（H2O2）处理组。用Western印迹和2’，7’?二氯荧光素?3’，6’?二乙酸酯（DCFHDA）法分别检测各组足细胞β1整合素和活性氧（ROS）的表达；噻唑蓝（MTT）法检测足细胞活力。 结果    PAN和H2O2可显著下调足细胞β1整合素表达，上调ROS表达（均P<0.05）。低浓度氟伐他汀、SOD可逆转PAN对足细胞的上述作用，显著上调β1整合素、抑制ROS的表达（均P< 0.05）。MTT结果显示PAN、高浓度氟伐他汀、H2O2显著降低足细胞活力（均P<0.05）；低浓度氟伐他汀、SOD可改善PAN对足细胞活力的影响（均P<0.05）。 结论    氟伐他汀可减轻PAN对足细胞的毒性，阻止足细胞β1整合素的下降，其机制可能与抑制PAN介导的ROS升高有关。
 

目的    探讨早期自噬激活对醛固酮诱导足细胞损伤的保护作用。 方法    体外培养永生性小鼠足细胞系，分别在醛固酮刺激6、12、24、48 h后应用Annexin V结合流式细胞术检测足细胞凋亡；透射电子显微镜检测足细胞凋亡小体和自噬小体；Western印迹检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、凋亡相关蛋白caspase?3及足细胞分子nephrin的表达；实时定量PCR检测自噬相关基因Beclin?1的表达。 结果    醛固酮（10-7 mol/L）呈时间依赖性诱导足细胞凋亡，下调nephrin表达。与对照组比较，醛固酮刺激24 h足细胞凋亡增加26.5%（P＜0.05），nephrin表达降低28.0%（P＜0.05）。醛固酮（10-7 mol/L）呈时间依赖性诱导足细胞发生自噬。与对照组比较，醛固酮刺激6 h自噬相关基因Beclin?1表达显著上调（P＜0.05）；醛固酮刺激12 h自噬标志蛋白LC3?Ⅱ/LC3?Ⅰ比值增加（P＜0.05）。应用3?甲基腺嘌呤（3?MA）抑制自噬后，醛固酮诱导足细凋亡的时间提前至刺激后12 h。3?MA处理组与醛固酮刺激24 h比较，足细胞凋亡增加39.0%（P＜0.05），nephrin表达进一步下调19.5%（P＜0.05），并且caspase?3明显活化（P＜0.05）。 结论    醛固酮可诱导足细胞发生自噬和凋亡；醛固酮刺激12 h时自噬明显活化；刺激24 h时凋亡显著增加。早期自噬激活可抑制醛固酮诱导的足细胞凋亡，并减轻足细胞损伤。以足细胞自噬为靶点可能成为治疗肾小球疾病的新研究方向。

目的   探讨黄蜀葵花（黄葵）治疗阿霉素肾病大鼠的疗效及其对足细胞病变的影响。 方法   雄性SD大鼠50只，按随机数字法分为假手术组（n=10）、模型组（n=10）、黄葵低剂量组（0.5 g•kg-1•d-1，n=10）、黄葵中剂量组（1.0 g•kg-1•d-1，n=10）和黄葵高剂量组（2.0 g•kg-1•d-1，n=10）。采用单侧肾切除联合两次阿霉素（ADR）注射法，制备阿霉素肾病大鼠模型。黄葵各组于右肾摘除术当天起给予相应剂量黄葵溶液灌胃。分别在术前、术后2、4、6、8周末检测大鼠尿蛋白、尿N?乙酰葡萄糖氨基转移酶（NAG）、血清白蛋白、Scr和血脂。第8周末宰杀大鼠，取肾组织行光镜和电镜检查，并观察肾组织nephrin的分布。 结果   与模型组比较，黄葵各组在各时间点的尿蛋白量和尿NAG水平均降低，以高剂量组最显著（P＜0.01）；且血浆白蛋白增加，血脂紊乱改善，差异均有统计学意义（P＜0.05）。模型组及黄葵各治疗组Scr自第4周起较假手术组明显升高；第8周末，黄葵高剂量组Scr低于模型组（P＜0.05）。黄葵各组肾小球球性硬化和节段硬化比例均低于模型组，肾小管间质损害改善，且以高剂量组最显著。与模型组比较，黄葵各组足细胞的足突损伤减轻，足突融合程度和范围均有所改善，以高剂量组最显著。黄葵各组肾组织nephrin表达较模型组增加。 结论  黄葵能减少阿霉素肾病大鼠的蛋白尿，减轻肾组织损伤和慢性化，其机制可能与改善足细胞病变有关。

目的     评估持续性红细胞生成素受体激活剂（CERA）每2周1次静脉给药与红细胞生成素β（EPO?β）相比在慢性肾脏病（CKD）透析患者中纠正贫血的疗效和安全性。 方法    采用开放、随机、平行、阳性对照、多中心临床试验方法。正在接受血液透析或腹膜透析且8周内未接受红细胞生成刺激剂（ESA）治疗的CKD贫血成年患者，随机（1∶1）接受CERA每2周1次静脉注射（CERA组，n=132例）或EPO?β每周3次静脉注射（EPO组，n=133例）持续治疗24周（包括16周纠正期和8周疗效评估期）。此后对达到目标血红蛋白（Hb）值（定义为首次给药后24周内在未输注红细胞的情况下，Hb≥110 g/L且与基线值相比上升≥10 g/L）的患者继续分别维持CERA或EPO?β治疗28周，以观察长期安全及耐受性。CERA的起始剂量为0.4 μg/kg。主要研究终点为前24周的Hb反应率及评估期（17～24周）Hb与基线值相比的变化。 结果    共计232例患者（87.5%）完成了前24周的治疗，198例患者（74.7%）完成了整个研究（52周）的治疗。CERA治疗组前24周的Hb反应率为87.12% [95%CI（80.2%~92.3%）]。根据其95%CI的下限高于60％（P＜0.01），认为CERA每2周1次静脉给药能有效纠正CKD贫血。符合方案（PP）人群中CERA组与EPO组评估期Hb相对基线变化的差异为-4.7 g/L [95%CI（-7.38 g/L~1.92 g/L）]。根据其95%CI的下限大于预先设定的非劣效性界值-7.5 g/L（P=0.0205），认为CERA纠正CKD贫血后维持Hb非劣效于EPO?β。在28周的延长期间两组的Hb水平均保持稳定。研究期间CERA组和EPO组的安全性结果相当，分别有50.0%及54.6%的患者报告了至少1件不良事件（AE），AE与研究人群的特征一致。  结论    在未接受ESA治疗的CKD透析患者中，每两周静脉注射1次CERA可有效纠正贫血，且纠正贫血后维持Hb非劣效于EPO?β治疗。CKD透析患者对于长期静脉注射给药CERA总体上耐受性良好。
   

目的    探讨磁共振（MR）功能成像方法在评价狼疮肾炎（LN）肾损害程度和反映肾脏病理改变方面的价值。 方法    LN患者17例使用GE 3.0T磁共振扫描仪、TorsoPA相控阵线圈，进行肾脏冠状面T1WI、T2WI、DWI及BOLD成像。用Functool软件测量肾脏的表观扩散系数（ADC）和表观自旋?自旋弛豫率（R2*）值。10例志愿者作为正常对照。分析LN患者的ADC和R2*值与临床指标和病理改变的关系。 结果    LN肾脏ADC值为（2.43±0.24）×10-3 mm2/s，皮、髓质R2*值分别为（11.72±2.35）/s和（13.07±2.35）/s，均显著低于正常肾脏测值（分别P=0.045，P=0.048和P= 0.001）。LN肾脏ADC值与eGFR显著相关（r=0.558，P<0.05），右肾ADC值与LN肾脏病理慢性指数呈负相关（r=-0.493，P<0.05）。髓质R2*值与24 h尿蛋白量、血肌酐、肾脏病理活动指数、肾小球病变和肾小管间质病变均呈负相关。将17例患者分为A组（Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型）8例和B组（Ⅴ+Ⅲ和Ⅴ+Ⅳ型）9例，B组肾小管功能损害较A组重，B组ADC值和皮质R2*值低于A组，髓质R2*值与A组差异无统计学意义。 结论    功能性MR检查显示LN肾脏ADC值和皮、髓质R2*值均显著低于正常肾脏，且与血肌酐、24 h尿蛋白量和肾小管功能、肾组织病理改变呈一定的相关性。DWI成像和BOLD成像检查为动态监测LN肾功能损害和肾组织病理改变提供了一种无创性方法，可能为临床干预的疗效评价提供依据。

目的　检测儿童原发性肾病综合征（PNS）激素使用前尿α1抗胰蛋白酶（AAT）水平，探讨其能否作为儿童PNS激素治疗敏感性的预测指标。 方法　43例PNS初治儿童，留取其激素使用前的晨起中段尿，应用ELISA法检测尿液中AAT的浓度，并经同份尿肌酐浓度校正。根据糖皮质激素治疗4周后的反应分为激素敏感（SSNS）组和激素耐药（SRNS）组，15例健康的体检儿童作为对照组（NC）。分析各组间数据差异及评价AAT的预测效能。 结果    对照组尿AAT检测阴性，SSNS组及SRNS组间尿AAT水平差异无统计学意义[（30.4±4.5） mg/L比（31.8±4.6） mg/L，t=-1.0，P=0.33]；而经尿肌酐校正后的尿AAT（尿AAT/Cr）在SRNS组显著高于SSNS组[0.049（0.028～0.073）比0.028（0.022～0.036），Z=2.4，P=0.02]。激素使用前SRNS组实验室指标中血小板计数、血白细胞计数、血清球蛋白水平、尿白细胞计数、尿红细胞计数、尿IgG水平及尿α1微球蛋白水平显著高于SSNS组（P<0.05）；其中尿AAT/Cr（OR=6.81×1028，P=0.005）、血清球蛋白（OR=1.69，P=0.01）及尿α1微球蛋白（OR=1.05，P=0.009）进入多因素Logistic回归模型，作为预测SRNS的独立因素。据两组尿AAT/Cr作ROC，曲线下面积（AUC）为0.72，当尿AAT/Cr 截取值为0.035时，预测效能最高，其灵敏度为68%，特异度为75%（Youden指数为0.43）。据回归模型中尿AAT/Cr、血清球蛋白及尿α1微球蛋白联合作ROC，其AUC为 0.94，灵敏度为95%，特异度为83%（Youden指数为0.78）。尿AAT/Cr在不同病理类型间差异无统计学意义。 结论　SSNS组及SRNS组间尿AAT水平差异无统计学意义，而SRNS患儿尿AAT/Cr显著高于SSNS患儿，其可作为PNS激素疗效预测指标；尿AAT/Cr联合血清球蛋白和尿α1微球蛋白对SRNS有更好的预测效能。
   

目的    研究非糖尿病慢性肾脏病（CKD）患者醛固酮逃逸的发生率及相关影响因素。 方法    选择非糖尿病CKD患者144例，予血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）或ARB联合血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）治疗12个月，根据治疗前后醛固酮浓度的变化，确定是否发生醛固酮逃逸。 结果    肾素?血管紧张素?醛固酮系统抑制剂（RASI）治疗6个月时醛固酮逃逸的发生率为14.58 %，治疗12个月时醛固酮逃逸的发生率显著升高（27.08%，P=0.009）。以治疗前水平为基线值，醛固酮逃逸的患者24 h尿蛋白量与基线值的差值显著小于未发生逃逸的患者（P<0.05），eGFR的差值也显著大于未发生逃逸的患者（P<0.01）。尿蛋白基线值（OR=3.643，P=0.073）、eGFR基线值（OR=0.980，P=0.025）与RASI治疗12个月醛固酮逃逸的发生相关；eGFR基线值（OR=0.980，P=0.025）是醛固酮逃逸的独立预测因素。 结论    部分非糖尿病CKD患者在RASI治疗后出现醛固酮逃逸，醛固酮逃逸的发生率随RASI治疗时间延长呈升高趋势。eGFR基线值是醛固酮逃逸发生的独立预测因素。醛固酮逃逸可能影响RASI减少蛋白尿和保护肾功能的治疗效 果。

目的    探讨慢性肾脏病（CKD）5期患者桡动脉中核心结合因子（Cbfα?1）和Ⅱ型胶原（ColⅡ）表达及其与血管钙化发生的关系。 方法    40例CKD5期患者在接受动?静脉内瘘手术时，留取一段桡动脉。对10例在本院接受胃大部切除术、肾功能正常患者，留取一段胃左动脉为对照组。钙盐沉积采用von Kossa染色法，根据von Kossa染色结果，CKD5期组又分为CKD5期无钙化组、轻中度钙化组和重度钙化组。Cbfα?1和ColⅡ的表达采用免疫组化染色法。同时测定血钙、磷、甲状旁腺激素（iPTH）、C反应蛋白（CRP）水平。 结果     40例CKD5期患者中有17例（42.5％）出现血管钙化，主要发生在血管中膜，对照组均未见血管钙化发生。CKD5期轻中度钙化组和重度钙化组中，动脉中膜均有Cbfα?1、ColⅡ的阳性表达；23例CKD5期无钙化组中，有18例（78.3％）至少有Cbfα?1、ColⅡ其中一种的阳性表达。对照组均无Cbfα?1、ColⅡ的阳性表达。CKD5期轻中度钙化组和重度钙化组，血管中膜Cbfα?1、ColⅡ免疫组化的阳性率均显著高于CKD5期无钙化组，但轻中度钙化组和重度钙化组之间的差异无统计学意义。CRP、钙磷乘积与Cbfα?1、ColⅡ呈正相关；血磷与Cbfα?1（r=0.786，P<0.01）、ColⅡ（r=0.785，P<0.01）呈正相关。 结论    CKD5期患者桡动脉钙化以中膜为主，钙化的动脉均有Cbfα?1、ColⅡ的高表达，且其表达早于组织学上血管钙化的发生。Cbfα?1和ColⅡ可能在血管钙化的发生、发展中起到了重要作用。
   

目的   通过构建NALP3?siRNA，观察其抑制大鼠肾小管上皮细胞（NRK?52E）NALP3表达的作用，探讨其对细胞缺氧复氧（HR）损伤的保护作用。 方法   （1）利用三气培养箱调整氮气压力条件形成缺氧条件，缺氧1 h，按复氧时间设复氧后1、2、4、8、16、24 h组，分别检测细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）含量以及细胞NALP3蛋白的表达。（2）NRK?52E转染NALP3?siRNA质粒，Western印迹法检测转染细胞NALP3蛋白的表达。（3）将细胞分为正常对照组、HR组、无关siRNA转染组和NALP3?siRNA转染组。分别于缺氧1 h、复氧4 h检测培养液上清LDH的含量和细胞NALP3蛋白的表达。（4）采用Annexin V/PI染色结合流式细胞仪、Western印迹法、电泳迁移率实验（EMSA）分别检测细胞凋亡率、细胞IκB?α、Bax和 Bcl?2蛋白的表达以及NF?κB DNA结合活性。 结果   （1）与对照组相比，NRK?52E 缺氧复氧后活细胞计数和细胞存活率显著下降（P＜0.05），细胞NALP3表达增加，在复氧 4 h达到高峰。（2）与无关siRNA转染组相比，NALP3?siRNA转染组NALP3蛋白表达水平显著下调（P＜0.05）。（3）缺氧复氧后，与无关siRNA转染组相比，NRK?52E细胞NALP3蛋白表达显著下降（P＜0.05）。（4）与对照组比较，HR后细胞IκB?α磷酸化和降解以及NF?κB DNA结合活性增加，细胞NALP3、Bcl?2和Bax 蛋白的表达明显上调，而NALP3?siRNA转染组细胞IκB?α蛋白的降解，NF?κB DNA结合活性以及Bax/Bcl?2 蛋白的比值均低于无关siRNA转染组（均P＜0.05）。同时，各组细胞凋亡率也明显增多，其中NALP3?siRNA转染组细胞凋亡率明显低于无关siRNA转染组（均P＜0.05）。 结论   NALP3?siRNA能够显著抑制肾小管上皮细胞内NALP3的表达，对肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NALP3表达，对NF?κB的活化以及Bcl?2和Bax蛋白表达的不同调控，减少细胞的凋亡。

目的    研究雌激素对尼古丁和维生素D3 （VDN）诱发的大鼠血管钙化消退过程的影响。 方法    96只SD雌性大鼠随机分为对照组（n＝24）和钙化组（n＝72）。首先制备VDN大鼠钙化模型，第1天维生素D3 300 000 U/kg肌肉注射，尼古丁（25 mg/kg溶于花生油）灌胃，9 h后重复灌胃1次。对照组8只大鼠予生理盐水0.2 ml肌注及单纯花生油灌胃。实验第4周末将血管钙化的大鼠（n＝64）随机分为单纯钙化组（VDN，n＝16）、钙化+假手术组（VDN+SHAM，n＝16）、钙化+去势组（VDN+OVX，n＝16）、钙化+去势+补充雌激素组（VDN+OVX+E，n＝16）。去势组为双侧卵巢切除，假手术组为切开腹腔，暴露双侧卵巢后关闭腹腔（不切除卵巢），去势+补充雌激素组为去势后皮下注射17β?雌二醇50 μg•kg-1•d-1。放射免疫法测定血浆雌激素水平。在第4、8、12周末各组分别处死8只老鼠，观察各组血管钙化变化的情况。 结果   成功制备了血管钙化的大鼠模型，第4周末，钙化组血管钙化明显，动脉中层可见大量钙盐沉积，血管钙含量显著高于对照组（P＜0.01）。第8周、12周末各钙化组大鼠的血管钙含量均较第4周减少（P＜0.01），钙化+去势+补充雌激素组最为显著，且各组之间差异亦有统计学意义（P＜0.01），病理变化类同。 结论   尼古丁和维生素D3 诱发的大鼠血管钙化是可以消退的，在雌激素的作用下，血管钙化消退更加明显。
 

目的    探讨改变组蛋白乙酰化修饰水平对转化生长因子β1（TGF?β1）调控系膜细胞（MC）内纤溶酶原激活物抑制物1（PAI?1）基因表达的影响。 方法    利用细胞转染技术使MC内高表达组蛋白乙酰化酶（HAT）的CREB结合蛋白（CBP）、P300或去乙酰化酶（HDAC）1、3、5，通过荧光素酶检测、实时定量PCR和Western印迹法，观察TGF?β1（5 μg/L）刺激下MC内PAI?1基因转录活性、mRNA及蛋白水平的改变；并利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA），观察其对PAI?1基因表达及TGF?β1?Smad蛋白信号途径的活性影响。 结果    TGF?β1    刺激增加了PAI?1基因的转录活性和mRNA水平（P＜0.05）；高表达CBP和P300显著促进了TGF?β1对PAI?1基因转录活化和mRNA及蛋白表达的调控（P＜0.05）；而高表达HDAC1、3、5及突变型CBP、P300则明显抑制了TGF?β1诱导PAI?1基因转录表达的调节（P＜0.05）。改变细胞内HAT/HDAC水平没有影响TGF?β1诱导Smad2/3蛋白磷酸化的作用。HDAC抑制剂TSA显著增加了TGF?β1诱导PAI?1基因转录表达的调节，但对TGF?β1?Smad2/3信号途径的活化作用没有影响。 结论    改变细胞内组蛋白乙酰化修饰水平能够影响TGF?β1对PAI?1基因的表达调控。

目的    探讨氟伐他汀对高糖腹透液（HGPDS）诱导人腹膜间皮细胞（HPMC）纤连蛋白（FN）表达的影响及机制研究。 方法    体外培养HPMC，随机分为正常对照组、HGPDS诱导组、HGPDS+GSK650394 [血清和糖皮质激素诱导的激酶1（SGK1）抑制剂，10-5 mol/L]组、不同浓度氟伐他汀组、单纯氟伐他汀（10-6  mol/L）组及GSK650394干扰组（10-5  mol/L）。倒置显微镜观察细胞形态，MTT法检测细胞活力，RT?PCR及Western印迹、ELISA法检测SGK1、FN的mRNA和蛋白表达。 结果    在HGPDS作用下，细胞由铺路石样转变为长梭形，细胞活力明显受抑（P＜0.05）。GSK650394及氟伐他汀（10-6  mol/L）可使细胞形态得到部分恢复，细胞活力明显改善（P＜0.05）。HGPDS明显增加HPMC SGK1、FN的mRNA及蛋白的表达，但可被GSK650394明显抑制（P＜0.05），而不同浓度氟伐他汀均具有与SGK1抑制剂的类似作用（P＜0.05），并呈浓度依赖性。 结论    高糖腹透液诱导体外培养人腹膜间皮细胞FN表达增加，氟伐他汀可以抑制FN表达，其机制可能与氟伐他汀抑制SGK1通路有关。
 

目的  探讨雷公藤甲素（triptolide）对转化生长因子β1（TGF?β1）诱导的大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响及机制。 方法    实验分组：（1）正常对照组；（2）TGF?β1（10 μg/L）组；（3）~（5）治疗组：不同质量浓度triptolide（0.4、2、10 μg/L）+ TGF?β1（10 μg/L）组。噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；原位末端标记法检测细胞凋亡；实时定量PCR法检测各组Ski、Smad3、Smad7 mRNA表达；Western印迹法检测各组I型胶原、Ski、Smad3、Smad7蛋白表达；间接免疫荧光技术检测Ski、Smad3细胞内定位。 结果    与对照组比较，triptolide可抑制TGF?β1诱导的系膜细胞增殖，差异有统计学意义（P＜0.05），且呈浓度依赖性。triptolide组细胞凋亡率大于50％，较TGF?β1组显著提高（P＜0.05）。实时定量 PCR及Western 印迹结果提示，与正常组比较，TGF?β1组Ski、Smad3、Smad7 mRNA及蛋白表达量均升高（P＜0.05）；与TGF?β1组比较，triptolide能够明显上调Ski、Smad7 mRNA及蛋白，下调Smad3 mRNA、蛋白及I型胶原蛋白的表达，呈浓度依赖性（P＜0.05）。激光共聚焦荧光显微镜观察到triptolide组Smad3细胞质内荧光强度增强，细胞核内荧光强度减弱，而Ski均有增强。 结论    triptolide可通过调节Ski、Smad7、Smad3 mRNA和蛋白的表达及Ski、Smad3的核转位，抑制TGF?β1诱导的肾小球系膜细胞的增殖，促进其凋亡，延缓肾纤维化。