张敏敏;顾勇;赖凌云;陈靖;杨海春;郝传明;林善锬
2006,22(8): 477-482.
目的 探讨醛固酮能否在肾小球系膜细胞(GMC)激活钠氢交换子1(NHE1),以及能否通过NHE1诱导GMC细胞外基质增生。 方法 体外培养大鼠GMC,并按如下分组:对照组(Con, 普通培养液);醛固酮组(Aldo ,10-7 mol/L);醛固酮+安体舒通组(Aldo+Spir 10-9 mol/L);醛固酮+NHE1抑制剂DMA组(Aldo+DMA 25 μmol/L)。24 h后收集培养上清液和各组细胞,抽提总RNA。用酸负荷后钠依赖的pHi(细胞内pH值)的变化来检测NHE1活性,同时采用实时PCR以及流式细胞术检测NHE1基因和蛋白的表达。采用实时PCR和ELISA方法检测纤连蛋白(FN) 基因和蛋白的表达。 结果 与对照组比较,Aldo组肾小球系膜细胞NHE1的活性(△pHi/100S)显著增高[Con (4.48±0.25) %, Aldo (5.29±0.11) %, P < 0.05]。加入安体舒通和DMA后,上述NHE1活性均有所降低[Aldo+Spir (4.92±0.35)%,Aldo+DMA (4.07±0.23)%,与Aldo组比较,P < 0.05]。实时PCR结果显示Aldo组NHE1 mRNA水平有所增高, 是对照组的1.16倍(P < 0.05), 而Aldo+Spir组NHE1 mRNA水平明显下降, 是Aldo组的81.9% (P < 0.05)。流式细胞术结果显示Aldo组NHE1蛋白水平显著增高,是对照组的2.9倍(P < 0.01),而Aldo+Spir组NHE1蛋白水平明显下降,仅为Aldo组的52.3% (P < 0.05), 安体舒通本身对NHE1的基因和蛋白表达没有显著影响。实时PCR结果显示Aldo组FN mRNA水平有所增高, 是对照组的1.03倍(P < 0.05);Aldo+Spir组和Aldo+DMA组FN mRNA水平有所下降, 分别是Aldo组的91.21% (P < 0.01)和92.30% (P < 0.01)。ELISA结果显示培养上清液中分泌的FN (ng/ml) 也表现为相同的趋势[Con(17.84±3.77),Aldo(51.66±1.40),P < 0.01; Aldo+Spir(29.60±1.99),Aldo+DMA(25.75±4.66),与Aldo组比较,P < 0.01]。 结论 醛固酮能够刺激肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分FN,其作用可能是由于醛固酮激活系膜细胞NHE1活性、上调其基因和蛋白表达所致。