目的 研究2型糖尿病（DM）患者不同蛋白尿期的肾小球滤过率并探讨其影响因素。 方法 根据尿白蛋白量（24 h）把630例2型糖尿病住院患者分成正常白蛋白尿组（A组）、微量白蛋白尿组（B组）及大量白蛋白尿组（C组），用放射性核素(99m Tc-DTPA)肾动态显像测定肾小球滤过率(GFR), 同时测定其体质量指数、血压、血糖、糖化血红蛋白、肾功能、血脂及尿白蛋白量（24 h）。 结果 （1）A组GFR值平均为（99.8±26.3） ml/min；B组为（96.1±31.2） ml/min；C组为（69.7±29.8） ml/min。C组的GFR显著低于A组和B组（P < 0.01）。（2）3组患者的GFR均与年龄呈负相关（A组r = -0.533，B组r = -0.612，C组r = -0.412，均P < 0.01）。（3）有高血压史者的GFR平均值均低于同组无高血压史者（P均< 0.05）。（4）控制年龄后的偏相关分析结果显示，在B组及C组，GFR与尿白蛋白量（24 h）呈负相关（r = -0.283 及-0.240，均P < 0.05）。多元逐步回归分析结果显示，尿白蛋白量（24 h）是影响异常蛋白尿组患者GFR的主要因素。 结论 放射性核素肾动态显像法测定GFR，同时联合尿白蛋白量检测，能更全面准确地评估糖尿病肾病的进展。应积极控制蛋白尿，尤其在微量白蛋白尿期。

目的 在国内首次报道人类免疫缺陷病毒（HIV）感染合并肾脏病2例。 方法 总结分析2例HIV感染合并肾脏病患者的临床和病理资料。 结果 例号1为69岁男性，临床表现为大量蛋白尿（肾病综合征），肾功能不全（Scr 142 μmol/L）,血清HIV-1抗体阳性。肾活检光镜下可见轻度局灶节段性肾小球硬化（FSGS），肾小管空泡变性，肾间质淋巴细胞浸润。免疫荧光全部阴性。电镜下足突基本融合，轻度节段硬化，足细胞未见明显肿胀、增生，肾小管轻度空泡变性，肾间质中可见吞噬细胞。诊断为HIV感染合并肾病综合征。由于诊断初期CD4大于200/μl，未行高效抗逆转录病毒治疗（HAART），只给予小剂量激素加免疫抑制剂治疗。经1年随访，CD4明显下降伴反复感染，遂停用激素和免疫抑制剂，开始HAART治疗。例号2为38岁男性，血友病甲（Ⅷ因子缺乏）患者，因输血同时感染HIV及HCV，临床以大量蛋白尿伴持续镜下血尿，难以控制的高血压和进展迅速的肾功能损害为主要表现。临床拟诊肾小球病变为主，考虑HIV感染合并肾脏损害。但由于该患者双肾已缩小，且合并血友病，无法行肾活检。HAART治疗3年后已进展至终末期肾功能衰竭，接受维持性腹膜透析治疗。 结论 应提高HIV感染合并肾损害的认识，必要时行肾活检对确诊病变类型及决定治疗方案有指导意义。

目的 观察结缔组织生长因子（CTGF）对大鼠肾脏成肌纤维细胞增殖及细胞外基质（ECM）成分Ⅰ型胶原生成的影响，并探讨ERK1/2途径在其中的作用。 方法 原代培养肾皮质成肌纤维细胞，应用5’-溴-2’-脱氧尿嘧啶（BrdU） 掺入法和细胞计数法检测细胞增殖；Western印迹法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原的蛋白水平及细胞内ERK1/2的磷酸化水平。 结果 CTGF明显促进成肌纤维细胞的增殖，呈时间和剂量依赖性，100 μg/L组第4天时，细胞数为对照组的1.6倍（P < 0.05）。CTGF刺激可显著增加培养上清液中Ⅰ型胶原的蛋白水平 [为对照组的（2.6±1.2）倍， P < 0.05]。CTGF刺激细胞5 min后ERK1/2即发生磷酸化，持续至15 min， 30 min以后迅速降至基础水平。用ERK1/2阻断剂PD98059预处理30 min后，CTGF促进细胞增殖效应（7%±5%比85%±7%， P < 0.01）和促Ⅰ型胶原分泌作用（1.0±0.1比1.6±0.3, P < 0.05）被显著抑制。 结论 CTGF能够促进成肌纤维细胞的增殖和Ⅰ型胶原的分泌，其作用可能通过ERK1/2信号通路实现。

目的 研究转化生长因子（TGF）β1诱导肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中相关靶蛋白的表达变化。 方法 应用比较蛋白质组学方法。用双向凝胶电泳（2-DE）对TGF-β1刺激组和对照组 NRK52E细胞总蛋白进行分离。两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定，并用RT-PCR和Western 印迹在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。 结果 鉴定出22个差异蛋白，包括与细胞骨架相关蛋白、参与物质转化和能量代谢的酶类、与蛋白翻译后修饰相关蛋白、细胞因子及其他蛋白等。应用RT-PCR验证了转胶蛋白（transgelin）、ATP合成酶α亚型、苹果酸脱氢酶、丝氨酸（半胱氨酸）蛋白酶抑制因子、泛素结合酶9（Ubc9）和表皮生长因子8在mRNA水平的表达差异，与2-DE结果一致。用Western 印迹验证了transgelin、ATP 合成酶α亚型两种蛋白的表达差异，亦与2-DE结果一致。 结论 TGF-β1刺激NRK52E细胞EMT发生过程中可诱导包括与细胞骨架相关蛋白、与翻译后修饰相关蛋白、代谢酶类及细胞因子等多种蛋白表达变化。本研究结果有助于深入理解EMT的具体分子机制及阐明肾脏疾病慢性进展的机制。

目的 探讨金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）抑制大鼠肾小球系膜细胞（RMC）凋亡与Janus激酶/信号转导和转录激活子（JAK/STAT）通路的关系。 方法 用无血清培养基体外培养pcDNA3空载体、人正义、反义TIMP-1基因重组真核表达载体转染RMC。根据是否加JAK2特异性抑制剂AG490刺激24 h,将细胞分为未转染组、未转染＋AG490组、空载体组、空载体＋AG490组、正义组、正义＋AG490组、反义组和反义＋AG490组。另外设正常培养条件下的RMC作为正常对照组。应用流式细胞技术检测各组RMC的凋亡率。RT-PCR检测TIMP-1、bcl-xl、cyclin D1、p27kip1和JAK2 mRNA的表达。Western印迹检测胞质中JAK2、STAT3、STAT5及其相应磷酸化蛋白(p-JAK2、p-STAT3、p-STAT5)的表达。 结果 未转染组、正义组及反义组RMC凋亡率分别为（10.59±0.96）％、（7.08±0.43）％和（21.91±0.25）％，各组间差异有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)。在未加AG490的各组RMC中,bcl-xl和cyclin D1 mRNA在正义组中表达最高，反义组中最低，p27kip1 mRNA在反义组中表达最高。加入AG490后，各组细胞的凋亡率均显著增加（P < 0.01）；TIMP-1、bcl-xl和cyclin D1 mRNA表达均减少；p27kip1 mRNA表达均增加。在未加AG490的各组细胞中，p-JAK2、p-STAT3和p-STAT5在正义组中表达最高，反义组中最低。加入AG490后上述蛋白表达均减少，且正义＋AG490组最高，反义＋AG490组最低。 结论 TIMP-1表达受JAK/STAT信号通路调控，后者可通过上调前者的表达抑制RMC凋亡；TIMP-1通过JAK/STAT信号通路抑制RMC凋亡。 bcl-xl、cyclin D1和p27kip1参与了上述过程。

目的 观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）等成骨样分化标志蛋白表达以及细胞外钙盐沉积的影响。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；Von Kossa法观察钙化染色；实时定量PCR法测定血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果 一定浓度范围内的TNF-α可促进hUASMC增殖；增加细胞外基质钙盐沉积。TNF-α 50 μg/L刺激可在第3天上调血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平（BAP mRNA：1.908±0.034比1.000±0.033，OPN mRNA： 3.600±0.073比1.000±0.079，均P < 0.05）。TNF-α 50 μg/L刺激可在第5天上调血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平（BAP蛋白：3.394±0.083比1.000±0.030，OPN蛋白： 1.967±0.134比1.000±0.070，BMP-2蛋白：2.745±0.289比1.000±0.208， 均P < 0.05）。 结论 一定浓度范围的TNF-α可刺激hUASMC增殖；介导细胞成骨样分化；增加细胞外基质钙盐沉积，从而参与血管钙化的发生发展。

目的 观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对人腹膜间皮细胞(HPMC) 基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP-9及其组织抑制物（TIMP）2、TIMP-1 mRNA和Ⅰ型胶原表达的影响，同时观察TNF-α、TGF-β、IL-1单独或协同作用对HPMC的MMP-9活性的影响。 方法 采用半定量RT-PCR法测定细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-2及TIMP-1 mRNA 的表达。采用Biotrak MMP-9 活性检测系统来精确定量测定MMP-9活性及MMP-9原的含量。ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。 结果 TNF-α(1~10 μg/L)分别刺激HPMC 4、16、24及48 h后， HPMC的MMP-9 mRNA表达显著上调，为基础的2.3～4.9倍（P ＜ 0.05），呈时间依赖性。TNF-α（1 μg/L）作用48 h后显著下调TIMP-1、TIMP-2 mRNA 表达，为基础的77.2％、61.3％（P ＜ 0.05），而MMP-2 mRNA表达没有显著变化。TNF-α+TGF-β１ （1~10 μg/L）、 TNF-α+TGF-β1+IL-1(1~10 μg/L)和TNF-α(5~10 μg/L)刺激HPMC 24 h后，促其分泌MMP-9 的作用最为明显。同时，TNF-α明显上调Ⅰ型胶原蛋白表达（P ＜ 0.05）。 结论 TNF-α 明显上调HPMC的MMP-9 mRNA的表达和MMP-9 的活性；联合其他细胞因子后促MMP-9分泌的作用更明显。TNF-α单独或协同其他因子在腹膜纤维化的过程中可能发挥了重要作用。

目的 观察大剂量螺内酯对自发性高血压大鼠（SHR）肾脏纤维化的影响。 方法 8周龄的雄性SHR 24只随机分为低剂量和大剂量螺内酯干预组[分别为20和100 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1螺内酯灌胃]和高血压对照组，同时设同源正常对照组京都大鼠（WKY）8只。干预8周，检测收缩压、尿蛋白、血白蛋白、钾、钠、Scr和肾组织及血浆醛固酮水平。肾组织切片分别行HE和Masson染色，以评价肾小球损伤及肾小球内胶原沉积情况。免疫组化SABC法检测肾组织TGF-β1和醛固酮受体蛋白表达。RT-PCR检测肾组织TGF-β1和醛固酮受体mRNA水平。 结果 与高血压组大鼠相比，低剂量螺内酯干预后，尿蛋白减少（P < 0.05），血白蛋白升高（P < 0.05），血浆和肾组织醛固酮水平降低，但差异无统计学意义；大剂量螺内酯干预后，血压没有显著改变，尿蛋白显著升高[（27.3±4.5）比（24.5±3.2） mg/d， P < 0.05]，血白蛋白显著减少[（20.2±4.2）比（22.7±3.5） g/L, P < 0.05]，血浆和肾组织醛固酮水平显著升高[肾组织（28.3±1.5）比（22.2±0.6） ng/g， P < 0.05]。与高血压组比较，低剂量螺内酯干预后，蛋白管型增多、管周炎性细胞浸润均减少（P < 0.05）；大剂量螺内酯干预后，蛋白管型、小管扩张加重，管周炎性细胞浸润明显增多（P < 0.05），肾小球内胶原形成亦明显增多（P < 0.05）。与高血压组大鼠比较，低剂量螺内酯干预后，肾组织醛固酮受体mRNA和蛋白表达均无显著改变，TGF-β1 mRNA和蛋白的表达显著减少（P < 0.05）；大剂量螺内酯干预后，肾组织醛固酮受体及TGF-β1 mRNA和蛋白的表达均显著升高(P < 0.05)。 结论 大剂量螺内酯可以加重高血压肾脏纤维化，可能是通过上调醛固酮及其受体表达实现的。

目的 利用人Nanog基因转染生物人工肾的种子细胞（肾近曲小管上皮细胞HKC），提高其增殖能力，在较短时间内获得大量种子细胞，为克服肾脏组织工程种子细胞来源的匮乏及生物人工肾的快速构建提供新途径。 方法 制备含有人Nanog基因的复制缺陷型重组腺相关病毒血清2型病毒颗粒rAAV2-hNanog，用rAAV2-hNanog转染肾小管上皮细胞,然后采用RT-PCR检测hNanog基因在转染的肾小管上皮细胞中的表达，再用MTT、免疫荧光及激光共聚焦技术检测hNanog基因对肾小管细胞HKC生长的影响。 结果 rAAV2-hNanog转染肾小管上皮细胞后，RT-PCR检测表明hNanog基因能在肾小管上皮细胞中稳定表达；同时，小管上皮细胞在转染后的增殖能力也显著增强（P < 0.05）。光镜下观察发现，转染的小管上皮细胞的形态无明显改变。 结论 利用hNanog基因提高生物人工肾小管种子细胞的增殖能力，可为生物人工肾的快速构建及应用提供一种新的方法。