目的 探讨薄基底膜肾病（TBMN）合并局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）的遗传学机制。 方法 对一病理学诊断为TBMN合并FSGS患者及其家系的COL4A3和COL4A4基因突变，应用与COL4A3和COL4A4基因连锁的微卫星标记连锁分析方法进行分析。PCR扩增COL4A3和COL4A4全部98个外显子后，直接测序筛查突变。同时测序排除已为公认的FSGS相关基因NPHS1、NPHS2、WT1、TRPC6、ACTN4、CD2AP突变导致FSGS的可能。 结果 微卫星标记连锁分析显示此家系与COL4A3和COL4A4基因连锁。直接测序在此家系中发现疾病患者COL4A4基因1214位的鸟嘌呤突变为腺嘌呤，导致Ⅳ型胶原α4链第405位甘氨酸突变为谷氨酸，并且发现COL4A3基因一多态性IVS1-4C>T。此多态性随疾病分布，可能与致病相关。未发现FSGS相关基因的突变。 结论 此家系是在TBMN的基础上发生FSGS。Ⅳ型胶原α4链突变及随疾病分布的基因多态性是否导致TBMN合并FSGS或使其易感性增加尚待更多家系进一步研究。

目的 探讨CD4+CD25high调节性T细胞（Treg）及辅助性T细胞亚群（Th1、Th2）比例失衡在IgA肾病（IgAN）免疫发病机制中的作用。 方法 用流式细胞仪检测IgAN患者外周血Treg及Th1、Th2的比例。以胞内染色技术检测叉头框蛋白3（FOXP3）的表达。Treg及Th1、Th2的比例与IgAN各项临床病理指标的相关性分析采用Spearman或Pearson相关分析法。 结果 IgAN患者外周血中Treg比例明显高于健康人[（2.14±0.82）％比（1.59±0.53）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.397，P ＜ 0.05），与eGFR呈负相关（r = -0.376，P ＜ 0.05）。IgAN患者外周血中Th2细胞比例显著高于健康对照组[（2.57±0.72）％比（1.81±1.10）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.468，P ＜ 0.05）。IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组（5.75±1.89比12.73±9.79，P ＜ 0.05），但与临床各指标间没有相关性。 结论 IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱。Treg在外周血中的增多以及以Th2为优势的Th1/Th2失衡可能在IgAN的发病中起重要作用。

目的 探讨血氧水平依赖的功能磁共振成像（BOLD-MRI）在早期移植肾排异中的诊断和预测作用。 方法 纳入2005年12月至2007年3月在浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心首次接受同种异体尸体肾移植患者共103例，分为肾功能正常组82例，急性排异组（病理证实）21例，记录两组的基线资料并测量移植肾皮、髓质磁共振参数R2*。 结果 急性排异组髓质R2*（MR2*）值显著低于肾功能正常组[（14.02±2.68）/s比（16.66±2.82）/s，P < 0.01]；ROC曲线分析显示MR2*值可作为急性排异的辅助诊断指标；肾功能正常组中低水平MR2*值（MR2*<14.9/s，23例）者日后发生急性排异的比例高于高水平MR2*值（MR2*≥14.9/s，59例）者，但差异无统计学意义（17.39％ 比 8.47％，P ＝ 0.259）。 结论 移植肾MR2*值可以作为肾移植术后早期急性排异的辅助诊断指标，并且可能有一定的预测价值。

目的 探讨慢性肾脏疾病并发肺孢子菌肺炎（PCP）的临床特点及预后。 方法回顾性分析北京协和医院经病原学确诊的原发和继发性肾脏疾病（除外肾移植）并发PCP 21例的临床资料。 结果 原发性肾脏疾病6例，继发性肾脏疾病15例。在合并PCP时，20例（95.2%）正在接受糖皮质激素和（或）免疫抑制剂治疗。PCP起病急骤，以发热、不同程度的胸闷憋气、呼吸困难、干咳少痰为主要临床表现。20例患者以发热起病，病程中17例患者出现高热。20例入院时即存在明显低氧血症，其中12例为I型呼吸衰竭。12例患者检测了T细胞亚群，8例CD4+T细胞低于0.2×109/L，其中5例低于0.1×109/L。除1例表现为双肺团块影外，20例胸部X线片提示弥漫性肺间质病变或CT示肺部磨玻璃样改变。所有患者接受三甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲基异恶唑(TMP-SMZ)治疗，死亡11例，占52.3%。与治愈组相比，死亡组患者发病年龄较大[（60.91±15.08）岁比（44.50±14.83）岁，P < 0.05]，就诊时血氧分压较低[(48.11±19.05) mm Hg比（65.91±13.13） mm Hg, P < 0.01]，需要呼吸机辅助呼吸及并发其他病原菌感染的比例更高。存活者平均随访16个月，无PCP复发。 结论 PCP是慢性肾脏疾病激素和免疫抑制剂治疗过程中的一个严重并发症，病情进展迅速，常导致死亡，早期诊断及治疗至关重要。

目的 通过构建钠-氢交换蛋白1（NHE-1）小干扰RNA (siRNA)抑制肾小管上皮细胞NHE-1的表达，探讨其对细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。 方法 根据人NHE-1全长基因序列设计并合成NHE-1-siRNA，转染人肾小管上皮细胞系（HKC），以无关siRNA转染组作为对照。利用10 μmol/L 抗霉素A诱导细胞来模拟缺血缺氧环境。用RT-PCR、Western印迹法检测NHE-1的表达。用BCECF/AM、Fluo-3/AM和SBFI-AM标记HKC，通过激光共聚焦显微镜分别检测其细胞内pHi、Ca2+和Na+浓度的变化。用Hoechst 33342染色技术及Annexin V/PI 染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化。 结果 特异性NHE-1-siRNA能有效抑制HKC的NHE-1表达，与无关siRNA转染组相比，NHE-1-siRNA转染组NHE-1 mRNA和蛋白表达水平明显下调(均P < 0.05)。抗霉素A刺激后，2组细胞NHE-1 mRNA及蛋白表达水平显著上调，而NHE-1-siRNA转染组低于无关siRNA转染组；同时NHE-1-siRNA转染组细胞凋亡率（8.9%±2.9%）明显低于抗霉素A处理组（18.8%±3.2%）和抗霉素A+无关siRNA转染组（17.4%±3.6%）（均P < 0.05）；NHE-1-siRNA转染组线粒体膜电位明显增高；与无关siRNA转染组相比较，NHE-1-siRNA转染组经抗霉素A处理后，细胞内钠离子、氢离子及钙离子增高的幅度较低（P < 0.05）。 结论 NHE-1-siRNA可抑制肾小管上皮细胞内NHE-1的表达，对抗霉素A诱导肾小管上皮细胞的缺血再灌性损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NHE-1表达，延缓细胞内Na+的积聚，减轻细胞内钙离子的超载，抑制损伤细胞的线粒体膜电位下降，减少细胞的凋亡。

目的 体外观察尿毒症患者血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）合成单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的影响，探讨诱导血红素氧合酶1（HO-1）高表达对调节MCP-1合成的作用。 方法 以含10％尿毒症血清的M199培养基体外培养HUVEC细胞株。采用RT-PCR法检测HUVEC MCP-1 mRNA的表达。用ELISA法检测HUVEC MCP-1蛋白的分泌。然后分别以HO-1诱导剂氯化血红素（hemin）及阻断剂原卟啉锌(ZnPP)预处理HUVEC，应用RT-PCR法和免疫组织化学法检测细胞内HO-1及MCP-1 mRNA及蛋白的表达。 结果 尿毒症血清可上调细胞MCP-1 mRNA的表达，促进MCP-1蛋白合成，MCP-1蛋白量为对照组的2.95倍。hemin诱导的HO-1高表达可下调尿毒症血清引起的MCP-1基因表达，抑制MCP-1蛋白合成，ZnPP可阻断其作用。30 μmol/L hemin可使HUVEC合成MCP-1蛋白减少34.4％，而hemin与ZnPP共同作用组的MCP-1蛋白量恢复至尿毒症血清组的98.0％。 结论 尿毒症血清可诱导HUVEC 的MCP-1高表达。促进HO-1高表达时可抑制MCP-1合成及分泌。HO-1有减轻尿毒症环境对内皮细胞功能损伤的作用。

目的 观察在高糖刺激下纤连蛋白（FN）与整合素连接激酶(ILK) 在肾小管上皮细胞的表达情况，探讨糖尿病肾病小管间质纤维化的发病机制。 方法 以人肾小管上皮细胞株（HKC）细胞和链脲佐菌素（STZ）诱导的CD-1小鼠糖尿病动物模型为研究对象，采用Western印迹的方法检测细胞或肾组织ILK和FN蛋白的表达。通过基因转染的方法，将含无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞，观察抑制ILK活力对高糖诱导的HKC合成FN的影响。 结果 STZ注射后4周，CD-1小鼠血糖水平显著高于对照组[(20.3±2.7) mmol/L比 （6.1±1.4） mmol/L，P < 0.01]，同时，肾组织ILK和FN的表达量亦显著高于对照组，且ILK与FN表达量呈正相关(P < 0.01)。细胞培养实验证实，高糖能够刺激HKC上调ILK和FN蛋白的表达，并且呈时间和剂量依赖性。HKC细胞转染pCMV-kdILK质粒以抑制ILK的活力，能够显著地拮抗高糖刺激HKC表达FN的作用。 结论 高糖通过上调ILK蛋白增加肾小管表达并合成FN，抑制ILK能够拮抗高糖刺激HKC合成FN的作用。

目的 观察pRetro-Super(PRS)反转录病毒载体介导的表达人结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(siRNA)对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC) 细胞外基质和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。 方法 根据siRNA靶序列要求及PRS反转录病毒载体特点分别设计4 对寡核苷酸，构建表达人CTGF基因siRNA 的PRS-CTGF-siRNA1～4重组反转录病毒载体。以脂质体2000将重组反转录病毒载体转染PT67包装细胞，继而感染HPMC。采用RT-PCR法检测mRNA表达及Western印迹法检测蛋白质表达。 结果 5 μg/L外源性转化生长因子β1（TGF-β1）刺激可诱导HPMC表达CTGF、纤连蛋白（FN）、I型胶原（Col I）、层粘连蛋白（LN）和VEGF明显增高； 而PRS-CTGF-siRNA 1～4组与TGF-β1刺激组比较，HPMC细胞内CTGF、FN、Col I、LN mRNA和蛋白表达和VEGF mRNA表达明显较低（P < 0.01），各干扰组对CTGF mRNA抑制率分别为 69.3％、22.2%、27.4%和38.8%，其中以PRS-CTGF-siRNA 1组最为明显；同时PRS-CTGF-siRNA 1组相对于TGF-β1刺激组，VEGF蛋白表达也明显较低（P < 0.01）；而PRS空载体组与TGF-β1刺激组比较，差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 PRS-CTGF-siRNA重组反转录病毒载体可明显抑制TGF-β1诱导的细胞外基质及VEGF表达的增加。

目的 研究大黄总蒽醌对大鼠肾脏水通道蛋白（AQP）2、AQP4表达的影响及探讨大黄利尿机制。 方法 32只SD大鼠随机分为正常对照组，大黄总蒽醌低、中、高剂量组，每组8只，分别给予不同剂量大黄总蒽醌灌胃，每天1次，共灌5 d。第4天测定大鼠24 h尿量，尿液Na+水平及尿渗透浓度。5 d后处死大鼠，腹主动脉取血，进行血液生化指标检测；并留取肾脏，用免疫组化、Western印迹和RT-PCR法检测肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达变化。 结果 与正常对照组比较，大黄总蒽醌中、高剂量组大鼠24 h尿量显著增加[(16.21±1.96) ml、(18.16±1.80) ml比（13.85±1.25）ml, P均＜ 0.05]，低剂量组大鼠尿量变化不明显；中、高剂量组大鼠肾脏AQP2蛋白及mRNA表达均显著下降（P均＜ 0.01），高剂量组大鼠肾脏AQP4蛋白及mRNA表达显著下降（P ＜ 0.01）；中剂量组大鼠AQP4蛋白表达下降（P ＜ 0.01），但mRNA表达无显著降低；低剂量组大鼠AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达无显著变化。 结论 大黄总蒽醌能降低大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达水平，这可能是大黄产生利尿的机制之一。