目的 分析薄基底膜肾病（TBMN）患者COL4A4基因点突变后导致编码蛋白中甘氨酸被其它类型氨基酸替代后的结构；探讨基因突变对编码蛋白二级结构的影响及与表型的关系。 方法 以临床确诊的1例常染色体显性连锁遗传型TBMN并发局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）患者为研究对象，该患者症状较重，临床表现为血尿、大量蛋白尿，基因检测确定为COL4A4中的g. 1214G>A导致p．G405E。对照选取1例健康人和1例文献报道的单纯TBMN患者（基因检测确定为COL4A4中的g. 1550G>A导致p．G448S）。应用E. coli分别表达患者α4（Ⅳ）链的含有突变位点的结构域及对照α4（Ⅳ）链的相同结构域，圆二色谱检测并比较它们二级结构的差异。 结果 TBMN并发FSGS患者重组蛋白的圆二色谱最低峰所在的波长由正常对照的208 nm变为约220 nm处，而且峰度降低。单纯TBMN对照重组蛋白的检测结果与健康对照相比改变较轻微，最低峰所在的波长不变，峰度仅轻度降低。二级结构分析显示，来自健康对照的重组蛋白中α螺旋、β折叠、转角和无规卷曲均存在，其中前二者各占约1/4。与健康对照蛋白相比，来自TBMN并发FSGS患者的重组蛋白中α螺旋结构增多，约占1/3，无β折叠结构；单纯TBMN对照的重组蛋白与健康对照相似，α螺旋的比例下降而β折叠增多。 结论 位于α4(Ⅳ)链相邻结构域的两个不同位置的甘氨酸被不同的氨基酸替代，它们的临床表型不同，α4(Ⅳ)链的二级结构也存在显著差异。而且，二级结构的改变程度与临床表型的严重性一致。

目的 研究我国中南地区长沙县农村人群中慢性肾脏病（CKD）的患病情况及相关危险因素。 方法 在湖南省长沙县采用分层多级随机抽样的方法，抽取果园镇、安沙镇及干杉乡20岁以上的常住居民1950人，进行CKD及相关危险因素的问卷调查、体格检查和血尿检测。 结果 在资料完整的1727名居民中，经过人口年龄、性别构成比校正后，白蛋白尿的患病率为8.5%；血尿的患病率为5.1%；肾功能下降的患病率为1.5%。该人群CKD的患病率为14.6%， 知晓率为16.5%。多因素Logistic 回归提示，年龄增加10岁、高胆固醇血症、高三酰甘油血症、高血压和糖尿病与白蛋白尿独立相关；女性、年龄增加10岁、高三酰甘油血症和高尿酸血症与肾功能下降独立相关；女性与血尿独立相关。 结论 在我国经济迅速发展的中南地区农村中，人群CKD的患病率为14.6%，知晓率为16.5%，CKD的疾病谱与我国大城市和发达国家类似。

目的 观察糖尿病肾病（DN）患者肾小管上皮细胞NF-κB及炎性介质表达的临床病理意义。 方法 选择经肾活检确诊的23例糖尿病肾病患者肾组织为DN组，以免疫组化法检测肾组织NF-κB p50、p65、单核细胞趋化蛋白（MCP）1、骨调素（OPN）等炎性介质及纤连蛋白（FN）、?琢平滑肌肌动蛋白（?琢-SMA）表达；原位杂交法检测NF-κB p65 mRNA表达，并进行半定量评分；选择10例肾癌切除术患者为对照组，取离癌组织大于5 cm处肾皮质，检测指标同DN组。采用Spearman等级相关法分析炎性介质表达与小管间质病理改变、尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿蛋白量（24 h）、肾小球滤过率（eGFR）之间的相关性。 结果 组织学检查显示，各期DN组患者多存在明显的肾小管上皮细胞变性、灶状萎缩、间质炎性细胞浸润及纤维化。免疫组化与原位杂交结果显示，对照组患者NF-κB、OPN和MCP-1在肾组织无明显表达，FN主要表达于肾小球，?琢-SMA主要表达于肾血管；DN组患者随着尿白蛋白水平的增加，NF-κB、OPN和MCP-1在肾小管表达显著增加，主要表达于结构相对正常的小管上皮细胞，在炎性细胞大量聚集及明显纤维化处表达较少；同时，肾间质?琢-SMA、FN表达也有明显增加，但主要表达于炎性介质阳性表达的小管周围及炎性细胞浸润与纤维化较明显的肾间质，二者均不表达于肾小管上皮细胞。相关分析显示，DN组患者肾小管NF-κB p65蛋白的表达与NF-κB p50蛋白、p65 mRNA表达呈正相关，r分别为0.792和0.763，均P < 0.01；与肾小管MCP-1、OPN表达呈正相关，r分别为0.825和0.869，均P < 0.01；与间质?琢-SMA、FN表达呈正相关，r分别为0.327和0.432，均P < 0.01；与尿蛋白量（24 h）、eGFR、尿NAG水平均相关，r分别为 0.710、-0.728、0.930，均P < 0.01。 结论 DN患者肾小管NF-κB及多种炎性介质表达明显上调，多分布于结构相对正常的肾小管上皮细胞。NF-κB及炎性介质的表达与蛋白尿、肾功能下降及肾间质纤维化等临床及病理表现密切相关，提示它们可能参与了人类DN的发生和发展。

目的 探讨妊娠并发肾病综合征患者的妊娠结局及肾功能的变化。 方法 回顾性调查我院2003年至2007年间59例妊娠并发肾病综合征患者的临床资料，包括患者出现肾病的时间、尿蛋白量、血浆白蛋白、Scr、血尿酸、血压；胎儿存活率、死亡率、早产率、出生体质量；以及孕妇产后随访蛋白尿、肾功能和血压情况。采用Logistic回归方法，分析影响妊娠患者的肾脏转归及胎儿预后的危险因素。 结果 孕妇出现蛋白尿孕周平均为（20.35±9.40）周，尿蛋白量（24 h）3.5~15.0 g，中位数5.1 g；血浆白蛋白10~28 g/L，中位数22.5 g/L；Scr 32~825 μmol/L，中位数84 μmol/L；血尿酸196~793 μmol/L，中位数385.5 μmol/L。妊娠高血压综合征发生率为75%，其中先兆子痫占55.5%。胎儿存活率72.9%（43/59），其中早产占76.7%（33/43）；低体质量儿占62.8%（27/43）。产后50%患者持续肾病综合征。24例原有慢性肾炎，其中75%患者蛋白尿较怀孕前有不同程度的增加。38例伴有肾功能受损，其中36.8%患者产后肾功能受损加重，23.7%进入终末期肾衰竭；其中80%发生在Scr≥265 μmol/L的患者。89%患者产后持续高血压。Logistic 回归结果提示，孕期高尿酸血症（P=0.018，OR=1.012）和Scr升高（P=0.039，OR=1.005）是孕妇产后肾功能受损加重的危险因素。高尿酸血症（P=0.012，OR=1.006）也是胎儿死亡的危险因素。 结论 妊娠并发肾病综合征患者的胎儿存活率低，其中高尿酸血症是威胁孕妇和胎儿的首要危险因素。

目的 了解胡桃夹综合征并发IgA肾病的临床特点及提高其相应诊治水平。 方法 回顾分析14例胡桃夹综合征并发IgA肾病患者（病例组）及同期36例单纯胡桃夹综合征患者（对照组）的临床资料。所有胡桃夹综合征病例均由彩色多普勒超声和磁共振血管成像（MRA）诊断；IgA肾病均由病理证实。记录两组实验室、影像学资料并进行t检验分析。 结果 两组患者性别、年龄、血压差异无统计学意义。病例组Scr值高于对照组[（81.2±21.3） μmol/L比（61.2±11.8） μmol/L，P < 0.01]，尿蛋白量较多[（1.1±0.6） g/d比（0.3±0.2） g/d，P < 0.01]，血尿更明显（尿红细胞计分2.3±0.9比1.5±1.3，P < 0.05）。彩色多普勒超声显示两组左肾静脉狭窄处及近肾门处血流速度和内径差异无统计学意义；磁共振血管成像提示两组患者肠系膜上动脉与腹主动脉之间的夹角差异无统计学意义。 结论 对持续存在血尿和蛋白尿、异常红细胞比例较高的胡桃夹综合征患者应考虑存在并发慢性肾炎特别是IgA肾病的可能，应及早行肾活检明确诊断。

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对肾脏球旁器颗粒细胞肾素分泌的调节作用。 方法 密度梯度离心原代分离小鼠肾小球球旁器颗粒细胞（JGC）。实时定量PCR法检测JGC内血管紧张素转换酶（ACE）、AngⅡ受体（AT）1型和2型（AT1和AT2） mRNA表达。不同浓度的AngⅡ与球旁器细胞共孵育后，放射免疫法测定上清中肾素活性；实时定量PCR法测定细胞内肾素mRNA表达；化学发光法测定细胞内、外环磷酸腺苷（cAMP)水平的剂量和时间效应。改变细胞内钙离子浓度后，观察JGC内和上清中cAMP浓度改变。实时定量PCR法检测AngⅡ对JGC内腺苷酸环化酶（AC）5和AC6 mRNA表达的影响。 结果 成功分离的JGC存在ACE、AT基因表达。AngⅡ可抑制JGC肾素分泌[（370.6±36.9）比（299.6±25.7） ng AngI&#8226;ml-1&#8226;h-1，P = 0.014]，并能抑制基础状态和前列腺素E2、去甲肾上腺素诱导的肾素mRNA表达。AngⅡ剂量依赖地降低JGC内和上清中cAMP水平。内质网上的Ca-ATP泵抑制剂毒胡萝卜内酯和环盐酸吗甲吡嗪酸均能剂量依赖地降低cAMP水平。细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM可降低细胞内钙离子浓度，进而使细胞内cAMP水平显著升高[（11.09±0.48）比（3.55±0.47） nmol/L，P < 0.01]。AngⅡ能通过减少42.12%的AC5 mRNA 表达，进而抑制肾素分泌。 结论 AngⅡ直接抑制肾素分泌可能是通过影响AC5，进而抑制cAMP表达来实现的。JGC内调节肾素分泌过程中，钙离子途径和GSα-cAMP两大信号传导途径中存在交联对话。

目的 观察血必净注射液对脂多糖（LPS）作用下大鼠腹膜间皮细胞（PMC）肿瘤坏死因子α（TNF-α）和高迁移率族蛋白1（HMGB-1）表达的影响。 方法 胰蛋白酶消化法用于PMC的原代培养和传代，经鉴定，第3代细胞用于实验。细胞随机分组：（1）正常对照组；（2）不同浓度LPS（1、10、100 mg/L）组；（3）不同时间LPS组：10 mg/L LPS 作用PMC 2、6、12、18、21、24、36 h；（4）血必净组：10 mg/L LPS预孵育2 h后，加入不同浓度血必净（2、10、20 g/L）再作用4及22 h。RT-PCR法检测HMGB-1 mRNA的表达。ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α和HMGB-1的蛋白量。 结果 （1）LPS呈剂量依赖和时间依赖性显著上调PMC HMGB-1 mRNA和蛋白表达，与对照组相比，差异有统计学意义（均P < 0.05）。（2） LPS刺激后，PMC TNF-α蛋白表达显著高于正常对照组，差异有统计学意义（P < 0.05），高浓度组更为明显，且36 h内表达出现双峰。（3）血必净可抑制TNF-α和HMGB-1的表达，与10 mg/L LPS组相比，差异有统计学意义（P < 0.05），随血必净浓度增加，抑制作用增强。 结论 HMGB-1作为晚期炎性因子参与了腹膜透析相关性腹膜炎的病理过程。血必净可明显下调TNF-α及HMGB-1的表达，减轻腹膜炎性反应损伤。

目的 探讨水通道蛋白(AQP)在多囊肾病囊泡上皮细胞的表达和调控。 方法 采用免疫荧光染色和Western印迹法分别检测不同亚型的水通道蛋白AQP1、AQP2、AQP3和AQP4在小鼠常染色体隐性遗传病jck多囊肾小鼠肾脏的表达定位和表达调控。 结果 8周龄jck纯合子小鼠的肾脏占体质量的百分率约是同窝野生型小鼠肾脏的4倍，肾脏组织出现多发、大小不一囊泡，囊泡上皮细胞呈扁平状，肾脏间质可见纤维化。jck小鼠血尿素水平为（42.6±6.7） mmol/L，约是野生型小鼠血尿素水平[（8.4±1.9） mmol/L]的5倍（P < 0.01）。免疫荧光定位分析结果表明AQP1 在近曲小管上皮细胞顶膜和基底膜表达，也表达于髓袢降支细段和直小血管降支，肾囊泡上皮细胞未见AQP1表达。AQP2在集合管和肾囊泡上皮细胞顶膜表达，AQP3和AQP4在集合管和囊泡上皮细胞基底膜表达。Western印迹分析结果表明，jck肾脏AQP2、AQP3和AQP4蛋白表达水平与野生型肾脏相似，但AQP1在jck肾脏的表达水平显著低于其在野生型肾脏的表达水平（P < 0.01）。 结论 jck多囊肾小鼠肾囊泡上皮表达AQP2、AQP3和AQP4，提示肾囊泡来源于肾集合管，水通道蛋白可能在肾囊泡生长过程中起重要作用。

目的 探讨NG2蛋白多糖参与肾小球硬化过程的可能机制。 方法 构建针对NG2的特异性shRNA（Psilencer-NG2）和对照shRNA（Psilencer-NC）。将Psilencer-NG2、Psilencer-NC和全长型NG2真核表达载体pcDNA/NG2以及空质粒pcDNAⅠ分别转染到体外培养的大鼠系膜细胞（RMC）。实时定量PCR和Western印迹检测转染质粒对NG2 的干扰效率和过表达效率；MTT法观察各组细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞周期变化；实时定量PCR检测各组层粘连蛋白（laminin）的表达。 结果 转染pcDNA/NG2后的HBZY-1细胞NG2 mRNA和蛋白表达水平均明显增加（P < 0.05，P < 0.05），而针对NG2的特异性shRNA干扰导致HBZY-1细胞NG2 mRNA和蛋白表达水平均显著下调（P < 0.01；P < 0.01），分别表明达到过表达和沉默NG2的效应。过表达NG2后，RMC中laminin β1表达显著增加（1.25±0.04比 1.00±0.09，P < 0.05）；RMC增殖明显，处于S期的细胞数明显增加，而G0/G1期的细胞数减少。而沉默NG2后，laminin β1表达显著减少（0.81±0.02比1.00±0.08，P < 0.05）；RMC增殖缓慢，处于G0/G1期的细胞数明显增加，而S期的细胞数减少。 结论 NG2蛋白多糖可能通过促进系膜细胞增殖和细胞外基质积聚参与肾小球硬化的过程。

目的 应用自发性高血压大鼠（SHR）建立具有胰岛素抵抗和早期肾脏损害特征的2型糖尿病模型。 方法 采用高糖高脂饲料喂养SHR大鼠2周诱导胰岛素抵抗，同时用WKY大鼠作为对照组。测定大鼠收缩压、血糖、三酰甘油、胆固醇及胰岛素水平，计算稳态模型评价的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。禁食12 h后，模型组予以腹腔注射链脲菌素（STZ）35 mg/kg，对照组予以相同剂量的柠檬酸缓冲液。注射STZ 72 h后测随机血糖，以血糖≥16.7 mmol/L为造模成功。观察8周后模型组与对照组的肾质量指数、收缩压、血脂、尿蛋白排泄以及肾脏病理变化情况。 结果 SHR大鼠高糖高脂饲料喂养2周后，与对照组相比，体质量、血脂、血糖均显著增加（均P ＜ 0.05），HOMA-IR也显著升高（5.03±0.38比2.61±0.34，P ＜ 0.05）。8周后，模型组大鼠多尿、多饮、体质量减轻，收缩压、血糖和糖化血红蛋白水平显著升高（P ＜ 0.01）。尿蛋白量（24 h）明显增加[（57.58±16.54） mg/24 h比（5.35±1.90） mg/24 h，P ＜ 0.01]，肾质量指数（mg/g）也增加（P ＜ 0.05），造模成功率为81.8%。病理改变为肾脏肥大，肾小球系膜基质增多，毛细血管基底膜增厚，足细胞空泡变性，足突消失，部分融合。 结论 联合高糖高脂饲料及小剂量STZ注射SHR大鼠成功制备2型糖尿病特征的动物模型，并诱导出糖尿病早期肾脏损害，为进一步研究2型糖尿病肾病发生机制和药物干预提供了简单实用的动物模型。