中华肾脏病杂志

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磷脂酶A2受体相关膜性肾病中铁死亡的生物信息学分析与实验验证

黄曼霞, 何雨阳, 李仰溥, 刘卓婷, 王燕青, 曾又佳

中华肾脏病杂志, 2025, 41(2): 81-89. DOI: 10.3760/cma.j.cn441217-20240827-00831

基因	引物序列（5'-3'）
GAPDH	上游：GAGTCCACTGGCGTCTTCAC 下游：TGGTTCACACCCATGACGAA
ATF3	上游：GCCCGCCTTTCATCTGGATTCTAC 下游：GACAATGGTAGCCACGGTGAAGG
CCDC6	上游：CCACCTCCGCCTCCACCTC 下游：GCCGAATGTTGCGAAGGAGTAGG

基因

引物序列（5'-3'）

GAPDH

上游：GAGTCCACTGGCGTCTTCAC

下游：TGGTTCACACCCATGACGAA

ATF3

上游：GCCCGCCTTTCATCTGGATTCTAC

下游：GACAATGGTAGCCACGGTGAAGG

CCDC6

上游：CCACCTCCGCCTCCACCTC

下游：GCCGAATGTTGCGAAGGAGTAGG

表1 实时荧光定量引物序列

本文的其它图/表

图1 PLA2R相关膜性肾病模型细胞铁死亡验证注：A：CCK?8法检测细胞增殖活性（n=6）；B：人肾足细胞株AB 8/13在普通正置显微镜下的形态（×100）；C：对照组和模型组Western印迹结果；D：PLA2R蛋白相对表达量（n=6）；E：GPX4蛋白相对表达量（n=6）；^a P<0.05，^b P<0.01；PLA2R：磷脂酶A2受体；GPX4：谷胱甘肽过氧化物酶4；β?actin：β?肌动蛋白；CCK?8：细胞活力检测试剂
图2 两组人肾足细胞株AB 8/13的形态（免疫荧光 ×200）注：F?actin：F?肌动蛋白；synaptopodin：突触足蛋白；DAPI：二脒基苯基吲哚
图3 健康对照组和磷脂酶A2受体相关膜性肾病（PMN）患者组差异基因筛选注：A：健康对照组和PMN患者组基因分析矫正、标准化处理后箱式图；B：主成分分析图；C：火山图；D：前20个差异表达基因热图；FC：差异倍数；GSM：基因表达数据库中的样本标识符（GEO Sample）；CCL3：趋化因子配体3；MAPRE3：微管相关蛋白RP/EB家族成员3；EGR2：早期生长反应蛋白2；FOSL1：FOS样1；MAFB：MAF BZIP转录因子B；SERPINE1：丝氨酸蛋白酶抑制剂家族E成员1；NR4A1：核受体亚家族4组A成员1；FOS：FBJ骨肉瘤癌基因；FOSB：FosB原癌基因；JUN：Jun原癌基因；B3GALT4：β?1，3?半乳糖基转移酶4；HTR2A：5?羟色胺受体2A；BMS1P5：BMS1核糖体生物发生因子假基因5；EID2：EP300相互作用的分化抑制因子2；RHBDD3：含菱形结构域3；GULP1：含PTB结构域的吞噬作用适配器1；EMID2：含Emilin和多聚蛋白结构域2；ELFN1：含细胞外富亮氨酸重复序列和纤连蛋白Ⅲ型结构域1；TRA1P2：肿瘤排斥抗原1假基因2；HLA?A29.1：主要组织相容性复合体，I类，A29.1
图4 将差异表达基因与铁死亡相关基因取交集获取关键基因
图5 磷脂酶A2受体相关膜性肾病与铁死亡相关的交集基因的基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析注：A：GO功能富集分析图；B：KEGG功能富集分析图
图6 磷脂酶A2受体相关膜性肾病与铁死亡相关的交集基因LASSO和SVM?RFE分析以及交集基因获取注：A：SVM?RFE分析图；B：LASSO回归分析图（最优λ值为0.007 849 997）；C：SVM?RFE分析与LASSO回归分析筛选特征基因的交集图；SVM?RFE：支持向量机递归特征消除；LASSO：最小绝对值选择与收缩算子
图7 各组细胞中ATF3和CCDC6的mRNA表达（实时荧光定量PCR）注： ATF3：激活转录因子3；CCDC6：卷曲螺旋结构域6；^a P<0.05，^b P<0.01
图8 各组细胞中ATF3、CCDC6蛋白的表达（Western印迹）注：A：模型组和对照组Western印迹结果；B：ATF3蛋白表达水平（n=6）；C：CCDC6蛋白表达水平（n=6）；CCDC6：卷曲螺旋结构域6；GAPDH：甘油醛?3?磷酸脱氢酶；ATF3：激活转录因子3；β?actin：β?肌动蛋白；^a P<0.05，^b P<0.01

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