目的 探讨羟基红花黄色素A（ Hydroxysafflor yellow A，HSYA）在β-甘油磷酸钠（β-GP ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）钙化过程中的作用及其机制。 方法 VSMC用10%胎牛血清+1%双抗高糖DMEM培养液，于37℃、5%CO2培养箱中培养，根据细胞生长密度按1∶4比例传代。实验分为3组：对照组（NC）、高磷诱导钙化组（HP）、HSYA干预 组（HSYA）。用茜素红染色和钙测定试剂盒（邻甲酚酞络合酮比色法）检测各组细胞钙沉积量；Western印迹法检测细胞钙化指标碱性磷酸酶（ALP），Runt相关转录因子2（RUNX2），核因子κB受体活化因子配体（RANKL），α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），及TLR4/NF-κB通路和炎性反应相关指标Toll样受体4（TLR4），白细胞介素8（IL-8），肿瘤坏死因子α（TNF-α）的变化。抽提细胞核蛋白和细胞质蛋白，Western印迹法检测细胞核NF-κB p65和细胞质p65，及细胞总蛋白中p65和磷酸化p65的改变。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒法检测细胞抗氧化酶和氧化终产物的改变。 结果 Western印迹结果显示，HSYA组细胞钙化指标ALP、RUNX2、RANKL的表达量较HP组明显减少；α-SMA表达较HP组增加（均P＜0.01）。HSYA组TLR4、TNF-α、IL-8和p-p65/p65的表达量较HP组减少，p65入核减少，细胞质内p65的表达增多（均P＜0.05）。 HSYA组细胞SOD含量较HP组明显升高，MDA 含量较HP组明显降低（均P＜0.01）。 结论 羟基红花黄色素A可减轻高磷诱导的血管平滑肌细胞的钙化，减少钙沉积。其机制与羟基红花黄色素A抑制了TLR4/NF-κB通路的激活和氧化应激反应有关。

目的 比较胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）抑制剂与胰岛素对2型糖尿病肾病（DKD）小鼠肾间质巨噬细胞浸润的改善作用。 方法 选取24只雄性C57BL/6小鼠，适应性喂养1周后，随机抽取6只作为对照组；其余小鼠高脂高糖喂养8周后，腹腔注射链脲佐菌素（30 mg/kg），72 h后随机血糖大于16.7 mmol/L，为2型糖尿病（DM）模型建立成功。DM小鼠8周后出现尿蛋白增加，即DKD造模成功。采用随机数余数法将DKD小鼠分为3组：DKD组、DKD+胰岛素组（胰岛素组，皮下注射1～2 U/d胰岛素）和DKD+IGF-1R抑制剂组（IGF-1R抑制剂组，给予30 mg?kg-1?d-1 IGF-1R抑制剂灌胃），每组6只，持续干预8周。血糖仪检测血糖；收集血液和尿液，生化仪检测血肌酐、尿素氮和尿蛋白等生化指标。收集肾脏组织，用苏木精-伊红染色（HE）和过碘酸希夫染色（PAS）检测肾脏病理变化，原位杂交检测细胞因子信号转导抑制因子2（suppressor of cytokine signaling 2，SOCS2）和胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1，IGF-1） mRNA，免疫组化检测SOCS2、F4/80、Toll样受体4（TLR4）、CD68蛋白的表达。 结果 相对于对照组，DKD小鼠血糖、血肌酐、血清尿素氮和尿蛋白排泄率明显较高（均P＜0.05），且DKD小鼠肾小管间质中CD68+细胞、F4/80+细胞以及TLR4表达均明显较多（均P＜0.05）。经胰岛素或IGF-1R抑制剂干预后，DKD小鼠血肌酐、血清尿素氮和尿蛋白排泄率均明显减少（均P＜0.05）。胰岛素干预可以明显降低小鼠血糖（P＜0.05），但对巨噬细胞无明显影响。IGF-1R抑制剂虽没有明显降低血糖，但是可明显降低DKD小鼠肾间质中CD68、F4/80阳性细胞数及TLR4蛋白的表达（均P＜0.05）。相对于DKD组，胰岛素干预明显减少IGF-1蛋白和mRNA表达（均P＜0.01），增加SOCS2 mRNA和蛋白表达（均P＜0.01），且胰岛素组SOCS2蛋白表达与F4/80+细胞数具有相关性（R2=0.8461，P=0.005）。然而IGF-1R抑制剂组SOCS2表达无明显变化，但具有更好的抑制巨噬细胞浸润的效果。 结论 IGF-1R抑制剂抑制DKD小鼠肾间质巨噬细胞浸润效果较胰岛素好，可能与胰岛素使SOCS2表达上调激活了一些潜在通路，而IGF-1R抑制剂不使SOCS2表达上调相关。

目的 探讨腹膜透析（PD）在冲击波诱导的大鼠肺损伤中的疗效及机制。 方法 45只成年Sprague Dawley大鼠随机分为对照组、假手术组和PD组。采用55 kg冲击波（BST-I）制造大鼠肺冲击伤。假手术组和PD组在冲击伤前行腹部置管术。PD组致伤1 h后给予2.5%腹膜透析液20 ml留腹，30 min后放出，如此反复12个循环。透析6 h后处死全部大鼠。部分损伤肺组织行HE染色评价病理形态学改变，剩余肺组织测肺含水量。收集动脉血液，血气分析仪和小动物肺功能检测仪检测肺功能。ELISA检测血清炎性因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平。 结果 与对照组比较，PD组肺组织肺泡结构相对完整，肺间质水肿减轻、炎性细胞浸润较少。PD组肺含水量较对照组明显降低（P＜0.05）。PD组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1均低于对照组（均P＜0.05）。PD组氧饱和度、氧分压、氧合指数、肺活量、功能残气量、最大呼气中期流率均高于对照组（均P＜0.05）。 结论 PD通过清除肺多余水分、血清中炎性因子，从而改善冲击波诱导的大鼠急性肺损伤。

目的 探讨清除肾组织巨噬细胞对补体C3缺失单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠肾间质纤维化结局的影响及其机制。 方法 8～12周龄的C57BL/6野生型（WT）和补体C3基因敲除（C3KO）小鼠用随机数字表法分为：野生型小鼠假手术组（WT/sham）；野生型小鼠UUO模型组（WT/UUO）；补体C3基因敲除小鼠假手术组（C3KO/sham）；补体C3基因敲除小鼠UUO模型组（C3KO/UUO），每组18只。左侧输尿管结扎法建立UUO模型。免疫组化法检测UUO术后梗阻侧肾组织补体C3的表达；免疫荧光法检测肾间质F4/80阳性巨噬细胞的分布和数量；Masson及HE染色观察肾组织病理改变，比较肾间质胶原纤维面积和肾小管-间质损伤指数评分。分别用巨噬细胞清除剂氯磷酸二钠（CLO）脂质体在UUO早期或晚期处理WT/UUO和C3KO/UUO组小鼠，观察肾间质巨噬细胞数量和肾间质纤维化的改变。F4/80和iNOS免疫双荧光、F4/80和CD206免疫双荧光观察WT/UUO和C3KO/UUO组术后巨噬细胞表型及M1/M2型巨噬细胞的比例。Western印迹法检测肾组织巨噬细胞标志蛋白诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1（Arg-1）、甘露糖受体（CD206）的表达。 结果 与WT/UUO组比较，C3KO/UUO组小鼠肾间质胶原纤维面积减少，肾小管-间质损伤指数评分降低（均P＜0.01），肾间质纤维化程度减轻。巨噬细胞清除剂早期或晚期处理后，WT/UUO组肾脏纤维化程度均较空白脂质体组减轻；C3KO/UUO组肾脏纤维化程度与空白脂质体组相比无明显改善。C3KO/UUO组早期肾组织M1型巨噬细胞占比及其标志蛋白iNOS较WT/UUO组表达降低，M2型巨噬细胞占比及其标志蛋白Arg-1、CD206表达增加（均P＜0.01）。 结论 补体C3基因敲除的UUO小鼠清除巨噬细胞后肾脏纤维化程度无明显改善，其机制与补体C3缺失影响肾组织巨噬细胞极化表型有关。

目的 研究p53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating protein two of p53，ASPP2）在四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠急性肾损伤（AKI）中的作用。 方法 雄性Balb/c小鼠32只，按随机数字表法将小鼠分为橄榄油对照组（对照组，n=8）和CCl4实验组（实验组，n=24）。用单次大剂量腹部注射CCl4的方法诱导小鼠AKI模型。实验组小鼠分别于CCl4注射后12 h、24 h和48 h处死，对照组小鼠于处理后24 h处死，收集小鼠血清和肾组织样本。自动生化仪上测定血清生化指标（Scr、BUN）；苏木素-伊红（HE）染色和高碘酸-希夫（PAS）染色观察小鼠肾组织病理学改变；免疫组化法观察肾脏中ASPP2的定位和表达；原位细胞凋亡检测小鼠肾组织细胞凋亡情况；Western印迹和实时荧光定量PCR法检测小鼠肾组织ASPP2蛋白和基因的表达水平。 结果 CCl4实验组小鼠血清Scr、BUN水平较对照组显著升高（均P＜0.01）。肾组织病理学检查显示，实验组肾组织部分肾小管刷状缘脱落，肾小管上皮细胞坏死，细胞核崩解变性。TUNEL染色显示实验组肾组织细胞凋亡率较对照组明显增高（P＜0.01）。与对照组相比，实验组小鼠肾组织ASPP2的表达随损伤时间的延长呈现先升高后下降的趋势，mRNA表达与蛋白质表达相一致，均于损伤后24 h达高峰（P＜0.01）。免疫组化结果显示，ASPP2主要定位于肾小管上皮细胞细胞质。 结论 腹腔单次大剂量注射CCl4可诱导小鼠AKI。伴随肾组织损伤的加重，ASPP2表达逐渐升高，提示ASPP2可能是一促损伤因子。

目的 探讨大鼠慢性支气管炎（chronic bronchitis，CB）诱导产生抗中性粒细胞胞质抗体（antineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）的机制。 方法 用烟熏法联合气管内注入脂多糖（LPS）诱导建立CB大鼠模型，LPS和佛波酯（PMA）反复刺激CB发作。分为正常对照组（n=5）、对照+PMA组（n=5）、CB组（n=5）、CB+PMA组（n=6）。检测4组大鼠肾功能，HE染色观察大鼠肺、肾组织病理变化，ELISA法检测血清中髓过氧化物酶（MPO）-ANCA、蛋白酶3（PR3）-ANCA和中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）标志物瓜氨酸化组蛋白H3（CitH3）的水平。采用Spearman秩相关分析CitH3与MPO-ANCA的相关性。应用免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜观察MPO、CitH3在肺脏、肾脏组织的表达和定位。 结果 （1）CB+PMA组大鼠血清CitH3、MPO-ANCA水平随时间变化均呈上升趋势，第6周末CitH3、MPO-ANCA水平均高于正常对照组、CB组（均P＜0.05）。大鼠血清CitH3水平与血清MPO-ANCA水平呈正相关（rs=0.490，P=0.024）。（2）CB组、CB+PMA组大鼠肺组织存在CB的病理表现，正常对照组、对照+PMA组大鼠肺组织未见明显异常。CB+PMA组大鼠肾脏组织中肾小球内及肾小管周围大量淋巴细胞浸润，炎性细胞黏附于血管壁，但尚未发现肾小球坏死。正常对照组、对照+PMA组和CB组大鼠肾脏组织未见明显异常。（3）CB+PMA组大鼠肺脏、肾脏冰冻组织免疫荧光双染激光共聚焦显微镜可观察到NETs沉积。 结论 CB大鼠在反复感染过程中，NETs在体内发生蓄积，其所含有的MPO抗原组分反复暴露，最终可导致MPO-ANCA的产生。

目的 探讨高盐饮食对小鼠肾髓质环氧化酶2（COX2）表达和尿钠排泄的影响及其相关机制。 方法 雄性C57BL/6j小鼠（n=30）被分为4组：（1）正常盐组（0.4%NaCl，n=5）；（2）高盐组（8%NaCl，n=5）；（3）硼替佐米+正常盐组（n=10）；（4）硼替佐米+高盐组（n=10）。各组予生理盐水或硼替佐米预处理后，分别予正常盐或高盐饮食3 d，实验最后1 d于代谢笼中留取小鼠24 h尿液。麻醉处死小鼠，分别留取肾脏皮髓质，提取蛋白，部分组织固定。采用Western印迹法检测各组小鼠肾髓质COX2蛋白表达；用免疫组化法检测肾脏核转录因子κB（NF-κB）p65亚基及COX2表达；自动生化仪测定24 h尿钠排泄量。另将携带NF-κB启动子驱动的luciferase报告基因HLL转基因小鼠（HIV long-terminal-repeat，LTR）（n=8）分为两组：（1）正常盐组：正常盐（0.4%NaCl）饮食；（2）高盐组：高盐（8.0%NaCl）饮食。3 d后麻醉处死动物，留取肾脏组织。采用荧光素酶检测试剂盒测定NF-κB的转录活性并以总蛋白量进行校正。 结果 （1）Western印迹结果显示，与正常盐组比较，高盐组C57BL/6j小鼠肾脏髓质COX2蛋白表达显著增加（P﹤0.05）。（2）NF-κB荧光素酶活性测定结果显示，与正常盐组比较，高盐组HLL小鼠肾脏髓质NF-κB活性表达显著增加（P﹤0.05）。免疫组化结果显示NF-κB p65亚基表达定位于肾髓质间质细胞。（3）与高盐组比较，硼替佐米+高盐组小鼠肾髓质COX2蛋白表达降低 （P﹤0.05）。（4）与高盐组比较，硼替佐米+高盐组小鼠24 h尿钠排泄量减少（P﹤0.05），组间尿量的差异无统计学意义。 结论 高盐饮食可诱导小鼠肾髓质COX2高表达并激活NF-κB活性，硼替佐米能抑制高盐饮食对肾髓质COX2表达的诱导。NF-κB通路可能参与了高盐饮食调节肾髓质COX表达及尿钠排泄。

目的 研究骨形态发生蛋白7（BMP-7）基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）对慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾脏的保护作用，并探讨其作用机制。 方法 通过慢病毒介导的基因转染技术获得表达BMP-7基因的BMSCs（BMSCs-BMP-7）和空载体-BMSCs（BMSCs-EV）。雄性Sprague-Dawley大鼠（n=30）被随机分为5组：正常对照组（CON，n=6）；CRF+PBS组（n=6）；CRF+BMSCs组（n=6）；CRF+BMSCs-EV组（n=6）和CRF+BMSCs-BMP-7组（n=6）。采用5/6肾切除术构建大鼠CRF模型，CON组为假手术组。于造模后2周开始，每周予CON组和CRF+PBS组经尾静脉注射1 ml PBS，另3组干预组分别注射1 ml对应的细胞悬液，干预12周后处死大鼠，留取血液及肾组织标本。用全自动生化检测仪检测Scr及血BUN；Western印迹法检测肾组织BMP-7、血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。 结果 实验终点时，与CON组比较，CRF+PBS组大鼠Scr和血BUN水平显著升高，差异有统计学意义（均P＜0.01）；与CRF+PBS组比较，CRF+BMSCs组、CRF+BMSCs-EV组和CRF+BMSCs-BMP-7组Scr和血BUN均有不同程度降低，差异有统计学意义（均P＜0.01）；CRF+BMSCs-BMP-7组大鼠Scr和血BUN水平低于CRF+BMSCs组和CRF+BMSCs-EV组，组间比较差异有统计学意义（均P＜0.05）。Western印迹结果显示：CRF+PBS组大鼠肾组织的BMP-7、VEGF表达量最低；CRF+BMSCs组、CRF+BMSCs-EV组和CRF+BMSCs-BMP-7组肾组织的BMP-7、VEGF表达量较CRF+PBS组显著升高（均P＜0.05）；CRF+BMSCs-BMP-7组肾组织的BMP-7、VEGF表达量显著高于CRF+BMSCs组、CRF+BMSCs-EV组（均P＜0.01）。CRF+PBS组肾组织TGF-β1表达量高于CON组（P＜0.01）；CRF+BMSCs组、CRF+BMSCs-EV组和CRF+BMSCs-BMP-7组肾组织TGF-β1表达量较CRF+PBS组显著降低（均P＜0.01）；CRF+BMSCs-BMP-7组肾组织TGF-β1表达量显著低于CRF+BMSCs组、CRF+BMSCs-EV组（均P＜0.01）。 结论 BMP-7基因修饰的BMSCs对CRF大鼠肾脏有保护作用，作用机制可能与其拮抗TGF-β1及上调VEGF的表达有关。

目的 观察慢性肾功能不全大鼠胫骨生长板甲状旁腺素相关蛋白（PTHrp）受体的表达情况及其对胫骨延长的影响。 方法 雄性2周龄Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、模型组和治疗组，每组20只。假手术组只切开暴露左侧输尿管后缝合，术后每天1次生理盐水灌胃；模型组进行左侧输尿管结扎，术后每天1次生理盐水灌胃；治疗组采用左侧输尿管结扎，术后每天1次依那普利灌胃治疗。术后4周收集大鼠24 h尿并测总蛋白含量；处死大鼠，心腔取血检测PTHrp浓度、肌酐、尿素氮。取左侧肾脏制成组织学切片并进行HE染色、Masson染色，观察肾小球、肾小管病理情况。取双侧胫骨测量全长，番红O染色观测胫骨生长板增殖区细胞柱细胞数量，免疫组化技术观测胫骨生长板区PTHrp受体表达情况。 结果 与假手术组比较，术后4周模型组大鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮均升高（均P＜0.05）；治疗组上述肾功能指标均低于模型组（均P＜0.05）。模型组和治疗组大鼠血PTHrp浓度均高于假手术组，而治疗组血PTHrp浓度低于模型组（均P＜0.05）。HE染色、Masson染色显示模型组肾小球萎缩且存在炎性细胞浸润，肾小管重度扩张，纤维化程度严重；与模型组相比，治疗组肾小球萎缩、炎性细胞浸润、肾小管扩张、纤维化程度减轻。模型组大鼠胫骨全长、生长板增殖区细胞柱细胞数、生长板PTHrp受体表达均低于假手术组（均P＜0.05），而治疗组3项指标均高于模型组（均P＜0.05）。 结论 肾功能不全大鼠血液中PTHrp浓度升高，胫骨生长板区PTHrp受体减少，生长板发育缓慢。

目的 观察甲状旁腺素（PTH）是否可诱导内皮细胞内皮-间充质转分化（EndMT）及进一步转化为脂肪细胞，并对其可能机制进行探讨。 方法 （1）动物实验：构建慢性肾脏病（CKD）合并甲状旁腺功能亢进大鼠模型。油红O脂肪染色检测大鼠骨髓脂肪组织含量，免疫荧光双染检测骨髓内皮细胞分化抗原31（CD31）和成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1）的表达情况。（2）细胞实验：体外培养人脐静脉内皮细胞，使用Western印迹检测不同浓度（0、10-11、10-9、10-7 mol/L，48 h）及时间（0、12、24、48 h，10-7 mol/L PTH）PTH干预下EndMT标志物CD31、FSP1和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达变化及不同浓度PTH干预下核转录因子β连环蛋白（β-catenin）表达变化，免疫荧光观察CD31、FSP1和β-catenin的表达及定位。PTH干预后脂肪细胞培养基进一步诱导分化1周，Western印迹和油红O脂肪染色分别检测脂肪细胞标志物过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPAR-γ）、CCAAT增强子结合蛋白-α （C/EBP-α）的表达和细胞脂肪量。使用siRNA阻断β-catenin信号通路，分为对照siRNA组、 β-catenin siRNA组、PTH+对照siRNA组和PTH+β-catenin siRNA组。Western印迹检测各组内皮细胞CD31、FSP1的蛋白表达及进一步诱导成脂后PPAR-γ的表达，油红O脂肪染色检测脂肪量。 结果 （1）CKD大鼠骨髓脂肪细胞多于对照组（P＜0.05），骨髓内皮细胞存在CD31和FSP1共表达。（2）PTH干扰降低内皮细胞CD31的蛋白表达，增加FSP1和α-SMA表达，且呈浓度和时间依赖性。10-7 mol/L PTH组和48 h组以上指标分别与0 mol/L PTH组和0 h组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。10-7 mol/L PTH干预48 h细胞质大量表达FSP1，并伴随CD31表达减少。进一步诱导分化成脂，PTH组PPAR-γ和C/EBP-α蛋白表达、脂肪量均高于对照组（均P＜0.05）。PTH干扰增加核转录β-catenin表达且呈浓度依赖性。10-7 mol/L PTH组β-catenin蛋白表达与0 mol/L PTH组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组β-catenin主要在细胞膜上表达，PTH组β-catenin大量进入细胞核中。与PTH+对照siRNA组比较，PTH+β-catenin siRNA组CD31、PPAR-γ蛋白表达和脂肪量均减少，FSP1蛋白表达增加（均P＜0.05）。 结论 PTH可诱导内皮细胞通过EndMT发生内皮-脂肪细胞转分化，从而参与CKD骨质疏松的发生。其作用与经典Wnt/β-catenin信号通路有关，阻断β-catenin能减轻PTH诱导的EndMT和脂肪细胞形成。

目的 观察高迁移率族蛋白1（high mobility group box-1 protein，HMGB1）在热射病（heat stroke）小鼠动物模型肾组织中的表达，探讨HMGB1在热射病相关急性肾损伤发病机制中的意义。 方法 采用健康雄性C57BL/6J 小鼠20只，按照随机数字表随机分为正常对照组（n=10）及热射病组（n=10），热射病组小鼠进入生物模拟仓（温度41℃，湿度70%）2 h，以肛温大于40℃为成模标准，采用18F脱氧葡萄糖标记小型正电子发射断层成像/X射线断层成像（micro-PET/CT）核素显像技术行活体显像。采集血标本检测血肌酐水平；HE染色观察肾组织病理改变；透射电镜检测线粒体形态改变；免疫组化法检测HMGB1及线粒体凋亡诱导因子2（apoptosis inducing factor mitochondria associated 2，Aifm2）定位表达情况；Western印迹法检测HMGB1、糖基化终末产物受体（advanced glycosylation end product-specific receptor，RAGE）表达情况；原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测肾组织细胞凋亡水平；液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）检测小鼠肾组织代谢组学，并通过KEEG数据库进行通路富集分析。 结果 （1）热射病组小鼠造模后45 min体温显著高于正常对照组（P＜0.05）；热射病组血肌酐水平显著高于正常对照组（P＜0.05）；micro-PET/CT显示热射病组小鼠骨骼肌、内脏出现18F脱氧葡萄糖广泛浓聚。（2）HE染色显示热射病组小鼠肾组织出现集合管出血、小管内皮细胞肿胀，在透射电镜下可见线粒体肿胀变形。（3）免疫组化显示Aifm2在肾小管上皮细胞广泛表达，热射病组表达水平显著高于正常对照组（P＜0.05）；HMGB1呈现细胞核阳性表达，在热射病组阳性细胞比例显著高于正常对照组（P＜0.05）。（4）Western印迹结果显示热射病组肾组织HMGB1、RAGE表达水平显著上升（P＜0.05）。（5）TUNEL检测结果显示热射病组凋亡细胞水平显著高于正常对照组（P＜0.05）。（6）正常对照组和热射病组肾组织间检出136种差异代谢物，经过KEGG数据库分析，不饱和脂肪酸代谢紊乱等代谢通路存在显著性差异，肾上腺素酸（adrenic acid）等在内的多种差异代谢物可能是发病机制中的重要调节点。 结论 急性肾损伤是热射病常见并发症，可能原因为全身高分解代谢导致的肾脏线粒体功能障碍及凋亡通路激活，与不饱和脂肪酸代谢紊乱及HMGB1活化可能存在相关性。部分差异代谢物可能在热射病相关急性肾损伤研究中存在较高的研究价值。

目的 探讨进展性肾病大鼠模型肾皮质能量代谢的变化及其相关分子机制。 方法 以5/6肾切除模型大鼠为进展性肾病模型，分为手术组和假手术组，于造模完成后1周和12周处死大鼠，留取血液、尿液及肾脏标本。检测血尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白量以评估肾功能。PAS染色和天狼星红染色检测肾组织病理改变。液相色谱-质谱串联靶向代谢组学定量分析肾皮质能量代谢物的表达。实时荧光定量PCR检测肾皮质炎性因子（白细胞介素1β、白细胞介素6）、纤维化因子（纤连蛋白、Ⅰ型胶原）、糖酵解及三羧酸循环相关酶的mRNA表达。Western印迹检测肾皮质纤维化因子（纤连蛋白、Ⅰ型胶原）、沉默信息调节因子（SIRT-1）和肝脏激酶B1（LKB1）的蛋白表达。 结果 与假手术组比较，手术组大鼠造模后1周和12周肾功能指标升高，肾组织病理损伤明显，肾皮质炎性因子及纤维化因子的mRNA表达上调，同时纤维化蛋白表达也上调（均P＜0.05），肾损伤随时间延长而加重。与假手术组比较，手术组大鼠1周时肾皮质糖酵解代谢物乳酸，三羧酸循环代谢物柠檬酸、异柠檬酸、草酰乙酸表达均上调，氧化磷酸化代谢物还原型辅酶Ⅰ表达上调（均P＜0.05），三磷酸腺苷（ATP）无明显变化，而12周时异常代谢物表达进一步增加，如糖酵解代谢物丙酮酸、氧化型辅酶I及ATP表达下调（均P＜0.05）。两组间磷酸戊糖途径代谢物还原型及氧化型辅酶Ⅱ差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与假手术组比较，手术组大鼠1周时肾皮质的糖酵解酶己糖激酶2、乳酸脱氢酶a的mRNA表达上调，三羧酸循环相关酶丙酮酸脱氢酶α、丙酮酸脱氢酶β、琥珀酸脱氢酶的mRNA表达下调（均P＜0.05），12周时异常代谢酶mRNA表达进一步增加。1周时两组大鼠肾皮质LKB1和SIRT-1的蛋白表达差异无统计学意义，而12周时手术组LKB1、SIRT-1蛋白表达低于假手术组（均P＜0.05）。 结论 在大鼠肾病进展过程中伴随肾纤维化和炎性反应，其肾皮质发生能量代谢改变。代谢改变表现为糖酵解增强，氧化磷酸化功能下降，且随病程进展而加重，其机制与能量调节蛋白LKB1及SIRT-1受抑制有关。

目的 从健康志愿者新鲜粪便中筛选人源产甲酸草酸杆菌并研究其防治草酸钙结石的作用。 方法 从健康志愿者新鲜粪便中筛选并分离培养人源产甲酸草酸杆菌。采用0.8% 乙二醇灌胃建立草酸钙结石大鼠模型。大鼠按随机数字表法分为对照组及4组乙二醇诱导的草酸钙结石模型组，其中3组草酸钙结石大鼠分别以106、107、108菌落形成单位（CFU）活菌干预4周。每周收集大鼠血及24 h尿液检测血钙、血镁、血磷、BUN、Scr、尿草酸、尿钙、尿镁、尿磷的变化。于第4周末处死大鼠，肾组织行HE、Yasue染色，偏折光镜下观察肾脏草酸钙结晶沉积部位及含量。 结果 分离出的菌株与已知美国模式菌种收集中心（ATCC）35274相似度为100%，由此判定已成功筛选出产甲酸草酸杆菌。第4周末5组大鼠间体重、Scr、BUN、血钙、血镁、血磷、尿镁、尿磷的差异均无统计学意义。第4周末造模组24 h尿钙排泄量显著低于对照组（P＜0.05），经产甲酸草酸杆菌菌液干预后，108 CFU组24 h尿钙排泄量升高，显著高于造模组（P＜0.05），其余干预组24 h尿钙排泄量与造模组差异无统计学意义。106 CFU组、107 CFU组尿草酸排泄量较造模组有所下降，但差异未达到统计学意义；108 CFU干预组在第1周末24 h尿草酸排泄量即显著低于造模组（P＜0.05），且持续至第4周末。干预4周后，偏折光镜下对照组无结晶形成，造模组可见肾皮质和肾髓质内大量草酸钙结晶形成，结晶成堆分布，相互连接；Yasue染色与肾脏同一部位草酸钙结晶重合；与造模组相比，106 CFU组、107 CFU组草酸钙结晶评分无明显改变，而108 CFU组肾脏草酸钙结晶评分显著降低（P＜0.05）。 结论 本研究已成功筛选出人源产甲酸草酸杆菌。每日给予108 CFU产甲酸草酸杆菌可安全、有效降低大鼠尿草酸排泄量，预防肾脏草酸钙结晶形成从而抑制结石形成。

目的 观察肾移植术后急性排斥大鼠外周血中叉头状转录因子3（Foxp3）阳性的CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+ Treg细胞）水平及其T盒转录因子TBX1（TBX1）和肌细胞特异性增强因子2D（MEF2D）表达变化，结合肾功能、血浆白细胞介素10（IL-10）、干扰素γ（IFN-γ）及肾组织病理变化，探讨其中的调控机制。 方法 建立大鼠肾移植模型，分为急性排斥组（急排组）和非急性排斥（非急排）组。测定两组大鼠肾功能（尿素氮和血肌酐）；ELISA法测定血浆中IL-10和IFN-γ；HE染色法观察肾脏组织病理。应用流式细胞术分选测定CD4+CD25+ Treg细胞；实时定量PCR测定CD4+CD25+ Treg细胞的Foxp3、TBX1和MEF2D mRNA表达；Western印迹测定CD4+CD25+ Treg细胞Foxp3、TBX1和MEF2D蛋白表达。 结果 与非急排组相比，急排组尿素氮和血肌酐均升高，IL-10下降，IFN-γ升高（均P＜0.05）。急排组肾组织病理出现肾小球肥大和系膜细胞显著增生，毛细血管增生和中性粒细胞浸润；肾间质明显水肿和肾小管坏死，伴有淋巴细胞、浆细胞及中性粒细胞浸润。与非急排组相比，急排组外周血CD4+CD25+ Treg细胞比例降低（4.50%±0.50%比5.74%±1.96%，P＜0.05），CD4+CD25+ Treg细胞Foxp3、MEF2D的mRNA和蛋白表达均降低（均P＜0.01），TBX1的mRNA和蛋白表达均升高（均P＜0.01）。 结论 肾移植急性排斥大鼠免疫耐受细胞CD4+CD25+ Treg细胞减少，Foxp3、MEF2D、IL-10表达降低，TBX1、IFN-γ表达增强，共同促进肾移植急性排斥反应的发生发展，加重肾损伤。

目的 探讨褪黑素（MT）对高糖刺激小鼠系膜细胞（SV40）的增殖、Toll样受体4（TLR4）信号通路及炎性因子表达的影响。 方法 分组：甘露醇对照组（30 mmol/L甘露醇），正常对照组（5 mmol/L葡萄糖），对照（5 mmol/L葡萄糖）+1000 μmol/L MT组，高糖组（25 mmol/L葡萄糖），高糖+10、100、1000 μmol/L MT组及高糖+TLR4抑制剂（TAK242）组。（1）利用CCK-8细胞毒性试剂盒检测细胞活力，EdU试剂盒测定细胞增殖。利用细胞免疫荧光观察TLR4的表达及核因子κB（NF-κB p65）的入核情况。（2）实时定量PCR检测TLR4 mRNA表达，实时定量PCR及ELISA法分别测定各组细胞下游炎性因子单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的mRNA和蛋白分泌水平；Western印迹检测TLR4通路蛋白TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、β干扰素TIR结构域衔接蛋白（Trif）、磷酸化干扰素调节因子3（p-IRF3）和磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκB）的表达。 结果 高糖可刺激系膜细胞增殖，促进TLR4表达、NF-κB p65核转移，而MT和TLR4抑制剂均可抑制上述现象，且MT的抑制作用呈浓度依赖性。与正常对照组比较，高糖刺激不仅上调TLR4、MCP-1、IL-1β和TNF-α mRNA的表达（均P＜0.05），而且MyD88、Trif、p-IRF3、pI-κB 的蛋白表达也明显增加（均P＜0.05）。与高糖组比较，高糖+10、100、1000 μmol/L MT组及高糖+TAK242组TLR4表达下调的同时，MyD88、Trif、p-IRF3、pI-κB、MCP-1、IL-1β、TNF-α的表达也降低了（均P＜0.05），且MT的干预作用呈浓度依赖性。 结论 高糖刺激增加了系膜细胞的增殖，MT可通过TLR4信号通路抑制高糖诱导的系膜细胞增殖和炎性因子表达。

目的 探讨冬虫夏草提取物虫草菌液（Cordyceps sinensis，CS）对高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的影响机制。 方法 用细胞增殖与活性检测试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测CS对细胞生存活力的影响；用β-甘油磷酸（β-GP，10 mmol/L））建立大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化模型，加入CS（10 mg/L）、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA， 5 mmol/L）及一磷酸腺苷（AMP）活化的蛋白激酶（AMPK）抑制剂化合物C（CC，10 μmol/L）进行干预，实验分为5组：对照组（Ctrl）、β-GP组、β-GP+CS组、3-MA+β-GP+CS组、CC+β-GP+CS组。通过茜素红S染色及钙测定试剂盒检测各组细胞钙沉积量；透射电镜观察VSMC内自噬体的形成；免疫荧光检测细胞质内微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达；Western印迹法检测血管平滑肌标志物α-SMA蛋白、成骨指标Runx2、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1及AMPK/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路蛋白。 结果 虫草菌液能使高磷环境中血管平滑肌细胞的自噬体、LC3荧光点状聚集及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、α-SMA、磷酸化（p）-AMPK蛋白表达增多，Runx2、p-mTOR蛋白表达及钙沉积减少（均P＜0.01）。用3-MA抑制自噬后，β-GP+CS环境中的血管平滑肌细胞 α-SMA蛋白表达减少（P＜0.01），Runx2蛋白表达及钙沉积增多（均P＜0.01），提示虫草菌液是通过激活自噬减轻了β-GP诱导的血管平滑肌细胞的钙化。用CC抑制AMPK/mTOR信号通路后，β-GP+CS组的血管平滑肌细胞的p-AMPK蛋白表达明显减少（P＜0.01）， 且LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、α-SMA蛋白表达量及自噬体、LC3荧光点状聚集也减少，p-mTOR、Runx2蛋白表达量及钙沉积增多（均P＜0.01），提示虫草菌液是通过激活依赖AMPK/mTOR信号通路的自噬而减轻了β-GP诱导的血管平滑肌细胞的钙化。 结论 虫草菌液能有效减轻高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化，其机制可能是通过激活AMPK/mTOR信号通路增强自噬。

目的 分析发生蛋白尿和不发生蛋白尿的db/db糖尿病（DM）小鼠肾组织中的长链非编码RNA（lncRNA）的差异表达，为探索糖尿病肾病（DN）的发病机制提供依据。 方法 随机挑选周龄相同的小鼠正常（db/m小鼠）组、DM（db/db小鼠）组各3只， DN（db/db小鼠）组2只，采用Illumina高通量测序得到3组小鼠肾组织组间差异表达lncRNA、mRNA及各自表达丰度值（fragments per kilobase million，FPKM）。通过lncRNA基因座位置等预测lncRNA的靶基因；通过GO、KEGG等数据库预测差异表达lncRNA的生物学功能。提取各小鼠肾组织的总RNA，使用实时定量PCR（RT-qPCR）筛选变化趋势与测序结果一致的lncRNA。 结果 与DM组小鼠相比，DN组小鼠尿白蛋白肌酐比 （UACR）、血肌酐、肾小球基底膜厚度均显著升高（均P＜0.05），而血糖差异无统计学意义（均P＞0.05）；与DM组小鼠相比，DN组小鼠有160个lncRNA表达上调，99个lncRNA表达下调；筛选小鼠DM及DN组FPKM 均≥2及组间差异表达倍数≥1的差异表达lncRNA，进行RT-qPCR验证，得到3个与测序结果一致的lncRNA。 结论 DM和DN db/db小鼠肾组织中lncRNA表达存在显著差异，这种差异表达有可能参与了DN的发病。

目的 探讨微小RNA-148b（miRNA-148b）在高糖诱导肾小管损伤中表达变化及其作用机制。 方法 体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2细胞），分为正常糖组、甘露醇高渗对照组、高糖组，培养48 h后，实时定量PCR法检测miRNA-148b表达；采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）在荧光显微镜下检测细胞内活性氧（ROS）水平；Western印迹检测HK-2细胞腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1（AMPKα1）、NOX2、NOX4、Bcl-2、cleaved-caspase3的蛋白表达。 结果 培养48 h后，与正常糖组相比，高糖组、高渗组HK-2细胞内miRNA-148b表达上调（P＜0.01），ROS产生增多（P＜0.01），NOX2、NOX4蛋白表达增多（均P＜0.01），AMPKα1蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达减少（均P＜0.01），线粒体凋亡通路相关蛋白cleaved-caspase3蛋白表达增加（P＜0.01），差异均有统计学意义。 结论 高糖上调体外培养HK-2细胞miRNA-148b的表达，靶向抑制AMPKα1的表达，促进NOX2、NOX4表达，活性氧产生增多，活化线粒体凋亡途径，激活caspase酶，诱导HK-2细胞凋亡。高糖的肾小管毒性部分是渗透压的影响。miRNA-148b可能参与了糖尿病肾病病理损伤的发生，有望成为糖尿病肾病新的治疗靶点。

目的 研究小鼠早期肾脏纤维化病变对缺血再灌注（IR）诱导的急性肾损伤（AKI）的影响。 方法 8～12周龄雄性C57BL/6小鼠被随机分为4组：（1）假手术（Sham）组（n=3）；（2）单侧输尿管结扎（UUO）组（n=6）：分为UUO术后3 d组（UUO3d，n=3）和UUO术后5 d组（UUO5d，n=3）；（3）肾脏缺血再灌注（IR）组（n=7），双侧肾脏缺血40 min再灌注24 h；（4）UUO3d+IR组（n=6）：UUO术后2 d双侧肾脏缺血40 min再灌注24 h（实际UUO时间为3 d）。HE及Masson染色观察各组小鼠急、慢性肾组织病理改变；Western印迹及免疫组织化学法（IHC）检测凋亡级联蛋白caspase-3表达；IHC法检测细胞增殖标志蛋白ki67的表达。 结果 HE及Masson染色结果显示，UUO 组小鼠出现随时间延长而加重的肾脏慢性病变，UUO3d组和UUO5d组小鼠肾间质基质纤维沉积面积明显高于Sham组，UUO5d组基质纤维沉积面积明显大于UUO3d组（均P＜0.05）。UUO3d+IR组小鼠肾脏间质出现大量炎性细胞浸润、管腔扩张、刷状缘消失、小管上皮细胞空泡变性、坏死脱落等急性小管损伤，同时合并肾小管萎缩、间质蓝染基质（纤维）增多等慢性损伤；急性小管损伤评分较IR组明显增加（P＜0.05）。UUO3d+IR组血肌酐水平较Sham组明显增高（P＜0.05）。免疫组化结果显示，相对于IR组UUO3d+IR组肾小管caspase-3表达明显增加，ki67阳性表达的肾小管细胞占比明显减少（均P＜0.05）。 结论 早期肾脏纤维化病变加重IR诱导的AKI，增加肾小管上皮细胞凋亡，减少肾小管上皮细胞损伤后的增殖修复。

目的 探讨G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen receptor，GPER）对肾叶间动脉舒缩功能的影响，及其减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用。 方法 雌性去卵巢大鼠被分为对照组；缺血再灌注损伤（IRI）组；GPER特异性激动剂（G1）干预组；GPER特异性阻断剂+GPER特异性激动剂（G15+G1）干预组。采用组织病理学检查（HE染色）、肾功能检测及Paller评分等方法鉴定模型成功与否及肾脏损伤程度；离体微血管压力直径测定仪检测各组大鼠肾叶间动脉舒缩活动情况；免疫荧光技术观察GPER在肾叶间动脉上的表达；Western印迹法检测各组大鼠肾叶间动脉GPER蛋白表达量；硝酸还原酶法检测血清NO含量。 结果 与IRI组比较，G1干预组大鼠血BUN、Scr水平及Paller评分明显降低（均P＜0.05）；肾叶间动脉收缩率明显升高[（40.76±1.57）%比（29.78±1.87）%，P＜0.05]。免疫荧光结果显示，GPER在肾叶间动脉平滑肌细胞及内皮细胞中表达，且IRI组较对照组表达增多；G15+G1干预组较G1干预组表达降低（均P＜0.05）。与IRI组比较，G1干预组大鼠血清NO含量显著上升（均P＜0.05）。 结论 肾脏缺血再灌注损伤过程中GPER可能通过提高NO含量，从而调节肾叶间动脉的舒缩活动，减轻肾缺血再灌注损伤。

目的 评估PCSK9（proprotein convertase subtilisin kexin type 9）对C57BL/6小鼠肾脏组织脂质平衡的影响以及损伤作用。 方法 12周龄的C57BL/6野生型小鼠和系统性敲除PCSK9基因小鼠通过代谢笼收集24 h尿，经心全身灌注，取出肾脏。采用ELISA方法检测尿微量白蛋白、血尿肌酐、血总胆固醇、肾组织内总胆固醇和甘油三酯水平，BODIPY 493/503染色，透射电镜（TEM）观察肾组织内脂质蓄积；PAS染色、TUNNEL染色以及qPCR和Western印迹法评估肾组织损伤及细胞凋亡。 结果 与C57BL/6野生型对照组相比，PCSK9 KO组肾组织内总胆固醇及甘油三酯水平升高（均P＜0.05），BODIPY 493/503染色显示肾小球及肾小管细胞内脂质染色明显加深，TEM提示肾小管细胞内脂滴数目显著增多。系统性敲除PCSK9基因小鼠较C57BL/6野生型对照组尿微量白蛋白/尿肌酐升高（P＜0.05），Podocin和Nephrin的转录水平下降（均P＜0.05），TEM可见肾小球内足细胞足突变短、不同程度的融合。与野生型对照组相比，PCSK9 KO组小鼠肾组织内Bax和Cleaved Caspase 3表达升高，Bcl-2表达下降（均P＜0.05）。 结论 PCSK9表达下降增加肾组织细胞内脂质蓄积，继而诱导肾固有细胞的损伤和凋亡。

目的 探讨自噬在高糖诱导足细胞脂质代谢中的作用及分子机制。 方法 （1）体外培养人永生化足细胞（human podocytes，HPC），分成正常对照组、高糖组和甘露醇组。油红O染色及细胞脂质含量测定观察高糖对足细胞脂质蓄积的影响；Western印迹检测脂质代谢相关分子胆固醇调节元件结合蛋白1（SREBP-1）表达水平。（2）体外培养HPC细胞，分成正常对照组、高糖组、高糖+3-MA（3-methyladenine，3-MA）组和甘露醇组。吖啶橙染色观察各组自噬体的形成，Western印迹检测自噬相关蛋白beclin-1、LC3-II/LC3-I表达水平，油红O染色及细胞脂质含量测定观察脂质蓄积程度，Western印迹检测脂质代谢相关分子SREBP-1表达水平。 结果 （1）与正常对照组相比，高糖可诱导细胞内脂质蓄积增加，脂质代谢相关分子SREBP-1表达上调（P＜0.05）；正常对照组与甘露醇组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）与正常对照组相比，高糖组自噬体增多，自噬相关蛋白beclin-1、LC3-II/LC3-I表达上调（均P＜0.05）；3-MA预处理抑制自噬，自噬体明显减少，自噬相关蛋白beclin-1、LC3-II/LC3-I表达下调（均P＜0.05），胞内脂质蓄积减少（P＜0.05），脂质代谢相关分子SREBP-1表达下调；上述指标在正常对照组与甘露醇组间差异无统计学意义（均P＞0.05）。 结论 自噬可能通过影响SREBP-1表达参与高糖诱导的足细胞脂质蓄积过程，抑制自噬可有效改善高糖诱导的足细胞脂质蓄积。

目的 探讨高磷和低钙对正常大鼠甲状旁腺组织分泌功能和细胞增生的影响。 方法 立体显微镜下切取正常大鼠两侧甲状旁腺，体外孵育5 d，分别于孵育后第2、3天用高磷或低钙干预。采用流式细胞术检测不同时间点各组细胞凋亡情况；ELISA法检测不同时间点各组细胞上清液全段甲状旁腺激素（iPTH）水平；荧光定量PCR法检测高磷或低钙干预24 h后组织中前甲状旁腺激素原（preproPTH）及增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA的表达；Western印迹法检测高磷或低钙干预24 h后组织中PCNA蛋白的表达。 结果 流式细胞术结果显示，大鼠甲状旁腺组织体外孵育后第1天和第2天的正常活细胞比例显著高于孵育后第3天至第5天（均P﹤0.05），孵育后第3天至第5天间活细胞比例的差异无统计学意义。正常磷或高磷培养基干预条件下，孵育后第1天至第5天间细胞存活率（均﹥85%）的差异无统计学意义。常规培养基孵育条件下，孵育后第1天至第5天间甲状旁腺组织分泌iPTH水平的差异无统计学意义。与正常对照组比较，高磷干预组培养液上清中iPTH水平升高（P﹤0.05），且高磷干预24 h后甲状旁腺组织preproPTH及PCNA mRNA和蛋白的表达显著上调（均P﹤0.05）。与正常对照组相比，低钙干预组培养液上清中iPTH水平升高（P﹤0.05），且低钙干预24 h后甲状旁腺组织preproPTH mRNA的表达显著上调（P﹤0.05）。 结论 体外孵育大鼠甲状旁腺组织是可行的，最佳孵育时间在2 d内。低钙、高磷刺激可增加PTH的合成与分泌，高磷还可促进细胞增生，是生理状态下调节甲状旁腺功能的重要因素。

目的 观察高糖环境中足细胞核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2（NOD2）、上皮-间质转分化（EMT）相关蛋白的表达，探讨NOD2参与EMT的分子机制。 方法 常规方法培养人肾小球足细胞，高糖刺激后细胞免疫荧光法检测EMT相关蛋白α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、nephrin的表达；实时荧光定量PCR和Western印迹法检测NOD2、锌指转录因子（Snail）和足细胞EMT相关蛋白α-SMA、结蛋白（Desmin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）及Nephrin的表达。shRNA干扰NOD2表达后再给予高糖刺激细胞，Western印迹法检测Snail及后续EMT相关蛋白的表达情况。用shRNA干扰Snail表达后，胞壁酰二肽（MDP）活化NOD2，Western印迹法检测E-cadherin、Nephrin、Desmin、α-SMA的表达。 结果 高糖刺激24 h后，与正常对照组相比，高糖组NOD2、Snail mRNA和蛋白的表达明显增加；上皮表型蛋白E-cadherin、Nephrin mRNA和蛋白的表达下调，间质表型蛋白Desmin、α-SMA mRNA和蛋白的表达上调（均P＜0.05）；高渗对照组无明显变化。干扰NOD2表达后，Snail及EMT相关蛋白表达异常均得到恢复，与高糖组相比差异有统计学意义（均P＜0.05）。与MDP组相比，MDP+shRNA-Snail组细胞E-cadherin、Nephrin蛋白的表达明显增加；Desmin、α-SMA表达明显减少（均P＜0.05）。 结论 高糖可诱导足细胞NOD2表达，并通过上调Snail表达促进足细胞上皮-间质转分化。以NOD2/Snail/EMT通路为靶点的基因干预可减轻高糖引起的足细胞损伤，可能为糖尿病肾病的治疗提供新思路。

目的 探讨高糖环境下肾小管上皮细胞来源外泌体诱导巨噬细胞激活的作用与机制。 方法 （1）正常糖（5.5 mmol/L）及高糖（30.0 mmol/L）分别处理人肾小管上皮细胞（HK2）48 h，收集两组上清液，使用超速离心法提取外泌体，采用透射电镜、Western印迹鉴定外泌体。（2）两组外泌体以PKH67标记后分别刺激人急性单核细胞白血病细胞株（THP-1）诱导分化的巨噬细胞，激光共聚焦观察THP-1巨噬细胞是否吞噬外泌体；显微镜下观察THP-1巨噬细胞的形态；Transwell小室法检测THP-1巨噬细胞的趋化能力；实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测THP-1巨噬细胞的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1/CCL2）水平；Western印迹检测各组p-JNK、p-p38MAPK和NF-κB p65蛋白的水平。 结果 （1）上清液经超速离心获取的囊泡，在电镜下观察到外泌体，粒径30～100 nm。Western印迹检测囊泡表达外泌体的标志蛋白CD63和TSG101，不表达Calnexin蛋白，提示所获取外泌体的纯度较高。（2）激光共聚焦证实各组外泌体均能被THP-1巨噬细胞吞噬。与正常糖外泌体刺激组相比，高糖外泌体刺激组的THP-1巨噬细胞趋化能力增强，iNOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1的表达和分泌水平均上调（均P＜0.01），p-JNK、p-p38 MAPK和NF-κB p65蛋白水平也显著升高（均P＜0.01）。 结论 高糖环境下肾小管上皮细胞分泌的外泌体可通过MAPK/NF-κB信号通路诱导巨噬细胞的激活和功能改变。

目的 观察吡非尼酮对db/db小鼠糖尿病肾病模型的疗效，并探讨其作用的分子机制。 方法 （1）以野生型小鼠为正常对照组，db/db小鼠分为模型组和吡非尼酮组，每组各6只。吡非尼酮组给予250 mg?kg-1?d-1吡非尼酮连续灌胃18周，其他两组以0.5%羧甲基纤维素钠灌胃。测定血糖、24 h尿白蛋白量；PAS 染色、PASM染色、Masson染色、天狼星红染色评估肾组织病理改变；免疫组化检测肾组织Ⅳ型胶原表达。（2）以小鼠肾小球系膜细胞（SV40 MES-13细胞）为体外研究对象。细胞分为对照组、高渗组、高糖组，及50、100、200、400、800、1600 mg/L吡非尼酮+高糖组，BrdU细胞增殖检测评估细胞增殖率。细胞分为对照组、高渗组、高糖组和吡非尼酮+高糖组，实时荧光定量PCR检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA的表达。 结果 （1）与正常对照组比较，模型组小鼠体重增加，血糖升高，伴有大量蛋白尿，并出现肾小球肥大、系膜区扩张、小管间质纤维化等病理改变，肾组织Ⅳ型胶原合成增加（均P＜0.05）。与模型组比较，吡非尼酮组db/db小鼠24 h尿蛋白量降低，肾小球肥大、系膜区扩张及小管间质纤维化减轻，肾组织Ⅳ型胶原的表达减少（均P＜0.05）。（2）与高糖组比较，100、200、400、800、1600 mg/L吡非尼酮+高糖组MES-13细胞增殖率均降低（均P＜0.05），400 mg/L吡非尼酮+高糖组α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、TGF-β1、IL-1β、IL-6、MCP-1 mRNA表达均减少（均P＜0.05）。 结论 吡非尼酮可抑制小鼠肾小球系膜细胞增殖及活化，下调TGF-β1及促炎因子的表达，减少胶原的合成，从而改善db/db小鼠肾纤维化。

目的 探讨高磷诱导的磷酸钙晶体是否通过BMP-2/Smad信号通路激活人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）成骨转分化。 方法 高磷培养基在37℃孵育3 d，超速离心法分离磷酸钙晶体和上清液，扫描电镜和能量色散X射线光谱仪分析晶体理化特征。体外培养HASMCs，分为高磷组、对照组、晶体组和上清液组。茜素红染色和邻甲酚酞络合酮法测钙化结节和细胞内钙含量。Western印迹法测骨形态发生蛋白2（BMP-2）、转录因子RUNX2、骨桥蛋白（OPN）、磷酸Smad1/5/9（p-Smad1/5/9）蛋白表达。HASMCs分别进行BMP-2和Smad1基因敲减，Western印迹法测蛋白表达。 结果 高磷培养基诱导磷酸钙晶体形成。与对照组相比，磷酸钙晶体促进HASMCs钙化结节形成，增加细胞内钙含量，上调BMP-2、RUNX2和OPN蛋白表达（均P＜0.05）。磷酸钙晶体刺激HASMCs 30 min后，p-Smad1/5/9蛋白水平达到峰值（P＜0.05）。敲减BMP-2基因后，磷酸钙晶体刺激HASMCs后p-Smad1蛋白表达受抑，RUNX2和OPN蛋白表达降低（均P＜0.05）。敲减Smad1基因后，磷酸钙晶体刺激HASMCs后RUNX2和OPN蛋白表达降低（均P＜0.05）。 结论 高磷诱导的磷酸钙晶体通过BMP-2/Smad信号通路促进HASMCs成骨转分化。

目的 探讨WNK3激酶对肾脏大电导钙激活钾通道（Maxi K通道）的调节作用及其机制。 方法 （1）在非洲绿猴肾成纤维细胞（Cos-7细胞）中转染0.5 μg Maxi K质粒的同时分别转染0、0.6、1.2、1.8 μg WNK3质粒，Western印迹检测细胞总蛋白中Maxi K通道的表达及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化水平。（2）Cos-7细胞分为转染2.5 μg Maxi K质粒组（对照组）和转染2.5 μg Maxi K质粒+2.5 μg WNK3 质粒组（实验组），细胞表面生物素化方法检测细胞表面膜蛋白中Maxi K通道的表达，免疫沉淀和Western印迹检测Maxi K通道蛋白泛素化水平。（3）用WNK3 siRNA沉默WNK3激酶基因，用质子泵抑制剂（Baf-A1）阻断溶酶体降解途径，Cos-7细胞分为Maxi K+阴性对照siRNA组、Maxi K+WNK3 siRNA组和Maxi K+WNK3 siRNA+Baf-A1组。Western印迹检测细胞中Maxi K通道蛋白的表达。 结果 （1）与0 μg WNK3质粒组比较，转染0.6、1.2、1.8 μg WNK3质粒组细胞总蛋白中Maxi K通道的表达均升高，MAPK ERK1/2的磷酸化水平均降低（均P＜0.01），且呈剂量依赖性。（2）与对照组比较，同时转染WNK3和Maxi K的实验组细胞总蛋白和膜蛋白中Maxi K通道的表达均增加，Maxi K通道蛋白的泛素化水平降低（均P＜0.01）。（3）与Maxi K+阴性对照siRNA组比较，Maxi K+WNK3 siRNA组Maxi K蛋白表达降低（P＜0.01），Maxi K+WNK3 siRNA+Baf-A1组的Maxi K蛋白表达无明显变化（P＞0.05）；与Maxi K+WNK3 siRNA组比较，Maxi K+WNK3 siRNA+Baf-A1组的Maxi K蛋白表达升高（P＜0.01）。 结论 WNK3激酶通过减少Maxi K通道蛋白的泛素化来抑制Maxi K通道的溶酶体降解途径，从而促进Maxi K通道在细胞内和细胞膜上的表达量。其机制可能与MAPK ERK1/2转导通路有关。

目的 研究A激酶锚定蛋白（AKAP1）在高糖诱导足细胞线粒体分裂中的作用及可能的信号转导通路。 方法 体外培养条件永生性人足细胞，完全分化并同步化处理后进行后续实验。实验分组：（1）葡萄糖浓度分为5、15、25、35 mmol/L组刺激足细胞48 h；（2）高糖（35 mmol/L）培养基分别刺激足细胞12、24、36、48 h；（3）正常对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高渗对照组（30 mmol/L甘露醇+5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（35 mmol/L葡萄糖）、高糖（35 mmol/L葡萄糖）+AKAP1 siRNA组。免疫荧光染色检测足细胞中AKAP1的表达和分布，Western印迹检测足细胞中AKAP1、线粒体动力相关蛋白1（dynamin related protein1，Drp1）、p-Drp1蛋白水平。Mitotracker Red染色观察各组足细胞线粒体形态，对长度、纵横比、形状系数定量分析。流式细胞术评价足细胞凋亡水平。 结果 与正常组比较，高糖刺激导致足细胞凋亡增加（P＜0.05），线粒体分裂增加、纵横比及形状系数降低（均P＜0.05），AKAP1蛋白表达水平、p-Drp1/Drp1以时间、浓度依赖方式增加（P＜0.05）；与高糖组比较，AKAP1 siRNA转染后线粒体分裂减少，线粒体纵横比及形状系数升高（均P＜0.05），足细胞凋亡减少；AKAP1蛋白水平及p-Drp1/Drp1下降（P＜0.05）；上述各项高渗对照组与正常对照组差异均无统计学意义（均P＞0.05）。 结论 高糖刺激下AKAP1可能通过线粒体Drp1调控足细胞线粒体分裂，导致足细胞损伤。

目的 观察腹膜纤维化大鼠模型中结缔组织生长因子（CTGF）和热休克蛋白47（HSP47）在腹膜中的表达，探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2-VitD3]抑制腹膜纤维化的可能机制。 方法 按随机数字表法将6周龄雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠分为3组：对照组(n=8)、模型组(n=8)和1,25-(OH)2-VitD3（VitD3）组(n=8)。腹腔注射含有0.1%葡萄糖和15%乙醇的氯己定（CHX）溶液0.2 ml/d构建腹膜纤维化（PF）模型。VitD3组于造模当日开始腹腔注射1,25-(OH)2-VitD3[6 ng?(100 g)-1?d-1]。4周后，观察各组大鼠腹膜转运功能、肾功能、腹膜厚度及血清25羟基维生素D3水平。原代培养SD大鼠腹膜间皮细胞分组为：对照组、高糖诱导组（HG，2.5%）、CTGF siRNA干预组（CTGF siRNA+HG）、VitD3干预组（VitD3+HG）和联合干预组（CTGF siRNA+VitD3+HG）。采用荧光定量PCR、Western印迹和免疫荧光检测CTGF和HSP47，ELISA检测纤维连接蛋白（FN）在腹膜组织和腹膜间皮细胞中的表达。 结果 与对照组相比，模型组大鼠腹膜超滤量明显降低（P＜0.05），腹膜厚度和腹透液尿素氮/血尿素氮（DUN/BUN）比值增加（均P＜0.05），腹膜组织CTGF及HSP47的表达均明显增加（均P＜0.05）。应用1,25-(OH)2-VitD3干预后，大鼠腹膜纤维化程度明显改善（P＜0.05），腹膜厚度下降（P＜0.05），CTG及HSP47的表达明显减少（均P＜0.05）。体外实验，经CTGF siRNA、1,25-(OH)2-VitD3和二者联合分别干预2.5%高糖诱导的腹膜间皮细胞，FN、CTGF及HSP47的表达量较高糖组均明显减少（均P＜0.05）。 结论 腹膜纤维化模型大鼠腹膜CTGF和HSP47的表达明显增加，1,25-(OH)2-VitD3可能通过下调CTGF的表达，降低HSP47和FN的表达，从而改善腹膜纤维化。