徐玄羽 廖如意 张丽 郑铭豪 叶智明 章斌 梁馨苓 史伟 刘双信
目的 探讨核因子-κB受体活化因子(RANK)在足细胞损伤中的作用及其对蛋白尿的影响。 方法 用Cre-LoxP重组酶系统建立足细胞RANK特异性敲除小鼠(RANK-/-,KO组),琼脂糖电泳法鉴定其基因型。设野生型小鼠(WT)和普通C57小鼠(各6只)为对照组。用脂多糖(LPS)腹腔注射方法建立短暂蛋白尿小鼠模型。检测各组小鼠尿白蛋白,尿肌酐等指标;模型建立后48 h处死小鼠取肾脏行病理检查。免疫组化法检测肾脏足细胞数量;电镜下观察足细胞足突融合情况;免疫荧光法检测整合素(integrin)β1及integrin β3等相关蛋白表达变化; Western印迹法检测integrin β1、integrin β3及尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)等相关蛋白的表达变化。 结果 3组小鼠均于造模后第2天出现明显蛋白尿,KO组小鼠尿白蛋白/肌酐比值明显低于对照组WT组及C57组[(23.70±9.90)比(107.56±22.32);(23.70±9.90)比(132.13±14.26),P<0.001],差异有统计学意义。免疫组化结果显示,造模后3组小鼠足细胞数量均有减少,KO组小鼠足细胞减少程度比其他两组轻。电镜结果亦显示,造模后KO组小鼠足细胞足突融合程度较对照组轻。免疫荧光结果显示,与造模前组相比,造模后各组小鼠肾组织integrin β1表达均有下降,KO组较对照组下降幅度更大;integrin β3表达升高,KO组升高幅度较对照组较少(均P<0.05)。Western印迹结果显示,与造模前组相比,造模后各组小鼠肾组织integrin β1表达均下降,KO组小鼠下降幅度更大;各组小鼠integrin β3及uPAR表达均升高,KO组升高幅度较其余两组较小(均P<0.05)。 结论 敲除小鼠足细胞特异性RANK基因后可以减少LPS诱导的蛋白尿,提示RANK参与了由足细胞损伤导致蛋白尿的发生,其机制与调节integrin β1,integrin β3及uPAR等分子的表达有关。