中华肾脏病杂志

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乙型肝炎病毒X蛋白通过调控Notch1信号通路诱导足细胞免疫紊乱

杨以通, 牛余超, 张树俭, 邵乐平, 袁伟杰

中华肾脏病杂志, 2024, 40(11): 882-893. DOI: 10.3760/cma.j.cn441217-20240520-00527

基因名称	种属	上游引物（5'-3'）	下游引物（5'-3'）
Notch1	人	CGCTACTCACGCTCTGATGCCG	TCCAGGTCTGTGGCTCGGTTCC
PLA2R	人	GCATACAATCAAAGGGAACACCC	TCGTGGCACACCACAGTAAG
TLR4	人	GAGCCCTGCGTGGAGGTGGTT	TCCAGAAAAGGCTCCCAGGGCTA
NLRP3	人	GATCTTCGCTGCGATCAACAG	CGTGCATTATCTGAACCCCAC
IL⁃1β	人	ATGATGGCTTATTACAGTGGCAA	GTCGGAGATTCGTAGCTGGA
Snai2	人	CGAACTGGACACACATACAGTG	CTGAGGATCTCTGGTTGTGGT
YES1	人	CTCAGGGGTAACGCCTTTTGG	CACCACCTGTTAAACCAGCAG
EGFR	人	TTGCCGCAAAGTGTGTAACG	GTCACCCCTAAATGCCACCG
CTNNB1	人	AGCTTCCAGACACGCTATCAT	CGGTACAACGAGCTGTTTCTAC
EP300	人	GCTTCAGACAAGTCTTGGCAT	ACTACCAGATCGCAGCAATTC
GAPDH	人	CTGGGCTACACTGAGCACC	AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG

表1 基因引物序列

本文的其它图/表

图1 各组小鼠尿蛋白量、血生化的比较及肾小球病理改变、肾组织HBx表达和免疫细胞浸润情况注：WT：野生型小鼠；HBV?Tg：HBV转基因小鼠；A：24 h尿蛋白；B：血肌酐；C：血尿素氮；D：肾小球病理形态及电镜下足细胞形态改变（PAS ×200；Masson ×200；电镜 ×7 000）；E：肾组织HBx蛋白表达及免疫细胞浸润（免疫组化 ×400）；与WT组相比，^a P<0.05；n=14
图2 各组足细胞Nephrin、HBx及细胞表面MHC?Ⅱ、CD40表达的比较注：Vector：转染空载体组；HBx：转染HBx质粒组；A：足细胞标志物Nephrin（红色荧光）和HBx（绿色荧光）共表达（免疫荧光 ×200）；B：足细胞表面MHC?Ⅱ、CD40表达（流式细胞术）；与Vector组相比，^a P<0.05；n=3
图3 各组足细胞培养上清中细胞因子含量的比较（ELISA）注：Vector：转染空载体组；HBx：转染HBx质粒组；MCP?1：单核细胞趋化蛋白1；TNF?α：肿瘤坏死因子α；IL：白细胞介素；IFN?γ：干扰素γ；与Vector组相比，^a P<0.05；n=3
图5 各组足细胞及小鼠肾组织Notch1蛋白表达的比较注：Vector：转染空载体组；HBx?24 h：转染HBx质粒24 h组；HBx?48 h：转染HBx质粒48 h组；shCtrl：转染Notch1 shRNA空载质粒组；shNotch1：转染Notch1 shRNA沉默质粒组；A、B：足细胞Notch1蛋白表达（Western印迹）；C：小鼠肾组织Notch1蛋白表达（免疫组化 ×400）；与Vector或shCtrl组相比，^a P<0.05；n=3
图6 Notch1过表达或沉默对足细胞表面MHC?Ⅱ、CD40表达的影响（流式细胞术）注：HBx+vector：转染HBx质粒+Notch1空载质粒组；HBx+Notch1：转染HBx质粒+Notch1质粒组；HBx+shCtrl：转染HBx质粒+Notch1 shRNA空载质粒组；HBx+shNotch1：转染HBx质粒+Notch1 shRNA沉默质粒组；A：足细胞表面MHC?Ⅱ；B：足细胞表面CD40表达；与HBx+vector或HBx+shCtrl组相比，^a P<0.05；n=3
图7 Notch1过表达或沉默对足细胞分泌细胞因子的影响（ELISA）注：HBx+vector：转染HBx质粒+Notch1空载质粒组；HBx+Notch1：转染HBx质粒+Notch1质粒组；HBx+shCtrl：转染HBx质粒+Notch1 shRNA空载质粒组；HBx+shNotch1：转染HBx质粒+Notch1 shRNA沉默质粒组；与HBx+vector或HBx+shCtrl组相比，^a P<0.05；n=3
图8 各组小鼠血生化、肾组织Notch1表达及免疫细胞浸润情况的比较注：WT+溶剂：WT小鼠+腹腔注射DMSO组；WT+DAPT：WT小鼠+腹腔注射DAPT组；HBV?Tg+溶剂：HBV?Tg小鼠+腹腔注射DMSO组；HBV?Tg+DAPT：HBV?Tg小鼠+腹腔注射DAPT组；A、B：小鼠血肌酐、尿素氮水平；C：小鼠肾小球病理形态改变（PAS ×200，Masson染色 ×200）；D：小鼠肾组织Notch1蛋白表达及免疫细胞浸润情况（免疫组化 ×400）；与WT+溶剂或HBV?Tg+溶剂组相比，^a P<0.05；n=6

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