中华肾脏病杂志

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叉头盒K1缺失减轻缺血再灌注诱导的急性肾损伤

李晨, 张璐, 王惠明

中华肾脏病杂志, 2024, 40(5): 379-388. DOI: 10.3760/cma.j.cn441217-20230818-00827

图5 特异性敲除肾小管上皮细胞Foxk1基因对小鼠肾组织肾小管早期损伤标志物及自噬相关蛋白的影响注：A：肾组织HE染色（×400），标尺=50 μm；B：各组血肌酐、血尿素氮水平；C、D：KIM?1、FOXK1、p62、Beclin1及LC3蛋白表达（Western印迹）；IR：缺血再灌注；KIM?1：肾损伤分子1；FOXK1：叉头盒K1转录因子；p62：螯合体1；Beclin1：苄氯素1；LC3：微管相关蛋白1A/1B?轻链3；β?actin：β肌动蛋白（内参）；与Foxk1^flox/flox 假手术组相比，^a P<0.05；与Foxk1^flox/flox IR组相比，^b P<0.05；n=6

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表1 基因引物序列
图1 3种急性肾损伤小鼠模型血生化、肾组织病理和KIM?1蛋白表达的改变注：A：各组血肌酐水平；B：各组血尿素氮水平；C：各组肾组织HE染色（×400），标尺=50 μm；D：各组KIM?1蛋白表达（Western印迹）；LPS：脂多糖；IR：缺血再灌注；KIM?1：肾损伤分子1；β?actin：β肌动蛋白（内参）；与生理盐水组或假手术组相比，^a P<0.05；n=6
图2 3种急性肾损伤小鼠模型肾组织中FOXK1蛋白及mRNA的表达注：A：各组FOXK1蛋白表达（Western印迹）；B：各组Foxk1 mRNA表达（实时荧光定量PCR）；LPS：脂多糖；IR：缺血再灌注；FOXK1：叉头盒K1转录因子；β?actin：β肌动蛋白（内参）；与生理盐水组或假手术组相比，^a P<0.05；n=6
图3 人肾小管上皮细胞（HK?2细胞）缺氧24 h、复氧6 h后FOXK1蛋白和mRNA表达的变化注：A：KIM?1蛋白表达（Western印迹）；B：FOXK1蛋白表达（Western印迹）；C：Foxk1 mRNA表达（实时荧光定量PCR）；HR：缺氧复氧；KIM?1：肾损伤分子1；FOXK1：叉头盒K1转录因子；β?actin：β肌动蛋白（内参）；与对照组相比，^a P<0.05；n=6
图4 肾小管上皮细胞特异性Foxk1基因敲除（Foxk1^cKO ）小鼠的构建注：A：Foxk1^cKO 小鼠构建策略；B：基因鉴定琼脂糖凝胶图；C：Foxk1 mRNA表达（实时荧光定量PCR）；D：FOXK1蛋白表达（Western印迹）；FOXK1：叉头盒K1转录因子；β?actin：β肌动蛋白（内参）；与Foxk1^flox/flox 组相比，^a P<0.05；n=6
图6 沉默Foxk1基因对HR诱导的人肾小管上皮细胞（HK?2细胞）肾小管早期损伤标志物及自噬相关蛋白的影响注：A、C、D：FOXK1、KIM?1、p62、Beclin1及LC3蛋白表达（Western印迹）；B：Foxk1 mRNA表达（实时荧光定量PCR）；FOXK1：叉头盒K1转录因子；KIM?1：肾损伤分子1；p62：螯合体1；Beclin1：苄氯素1；LC3：微管相关蛋白1A/1B?轻链3；β?actin：β肌动蛋白（内参）；HR：缺氧复氧；与阴性对照shRNA（shCtrl）组相比，^a P<0.05；与shCtrl HR组相比，^b P<0.05；shFoxk1：Foxk1基因沉默；n=6

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